Anti-Phospho-POLR2A CTD-S2 polyklonaler Antikörper für WB, IP, ELISA - P24928

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: POLR2A (DNA-abhängige RNA-Polymerase II Untereinheit RPB1) Funktion und Lokalisierung

• POLR2A kodiert die größte und katalytische Untereinheit der RNA-Polymerase II (Pol II), einer DNA-abhängigen RNA-Polymerase, die für die Synthese von mRNA-Vorläufern und vielen funktionellen nicht-kodierenden RNAs verantwortlich ist (PubMed:23748380, PubMed:27193682, PubMed:30190596, PubMed:28108474). Verwandte Referenzen: PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:30190596 PMID:28108474
• Zusammen mit der zweitgrößten Untereinheit POLR2B bildet es das Pol II-Aktivzentrum, fügt Nukleotide an die entstehende RNA an und ermöglicht Korrekturlesen durch eine 3'->5' Exonuklease-Aktivität (PubMed:30190596, PubMed:8381534, PubMed:9852112). Verwandte Referenzen: PMID:30190596 PMID:8381534 PMID:9852112
• Die einzigartige C-terminale Domäne (CTD) besteht aus 52 tandemartigen Heptapeptid-Wiederholungen (YSPTSPS) und dient als dynamische Plattform für die Assemblierung von Faktoren, die Transkriptionsinitiation, Elongation, Termination und co-transkriptionelle mRNA-Verarbeitung regulieren. Phosphorylierung an Ser5 fördert den Promotorescape, während Phosphorylierung an Ser2 entscheidend für die Pausenfreigabe und produktive Elongation ist (PubMed:24207025, PubMed:26124092). Verwandte Referenzen: PMID:24207025 PMID:26124092
• Zusätzlich zur DNA-abhängigen RNA-Polymerase-Aktivität besitzt POLR2A eine RNA-abhängige RNA-Polymerase-Funktion, verlängert nicht-kodierende RNAs und ist an der Virusreplikation beteiligt, z.B. mit dem Hepatitis-Delta-Virus.
• Posttranslationale Modifikationen von POLR2A umfassen Phosphorylierung, Acetylierung, Methylierung und Ubiquitinierung, die seine Aktivität und Interaktionen fein abstimmen.
• POLR2A lokalisiert hauptsächlich im Zellkern, kann aber auch im Zytoplasma und in Assoziation mit Chromosomen gefunden werden, was seine Rollen in der Transkription und darüber hinaus widerspiegelt.
• Das berechnete Molekulargewicht beträgt ungefähr 217 kDa.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phospho-Peptid, das Ser2 der humanen POLR2A CTD-Wiederholung entspricht; die Antikörperspezifität sollte mit Phosphatase-behandelten Lysaten oder einem nicht-phosphorylierten Blockierpeptid bestätigt werden.
• Für Western-Blot-Anwendungen sollten geeignete Phosphatase-Inhibitoren in Lysis- und Probenpuffern enthalten sein, um das Phosphorylierungssignal zu erhalten.
• Stellen Sie bei der Durchführung von Immunpräzipitation sicher, dass die Zusammensetzung des Lysis-Puffers die Integrität des Phospho-Epitops aufrechterhält; Vorreinigung der Lysate kann unspezifische Bindung reduzieren.
• Für ELISA kann die Beschichtung mit dem immunisierenden Phospho-Peptid und der Nachweis mit diesem Antikörper verwendet werden, um die Phospho-spezifische Bindung zu bewerten; berücksichtigen Sie die Kreuzreaktivität mit unphosphorylierten Peptidkontrollen.
• Dieser Antikörper kann auch andere Proteine mit ähnlichen Phospho-Motiven erkennen; validieren Sie dies im relevanten Probensystem.

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