Anti-Phospho-PLK1-T210 Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB und ELISA - P53350

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von PLK1

• Serin/Threonin-Protein-Kinase PLK1, auch bekannt als Polo-ähnliche Kinase 1 und STPK13, ist ein Hauptregulator mehrerer Ereignisse während der Mitose, einschließlich Zentrosomenreifung, Spindelaufbau, G2/M-Übergang, Kinetochorfunktion, Schwesterchromatidkohäsion, mitotischer Austritt und Zytokinese. Zugehörige Referenzen: PMID:11202906, PMID:12207013, PMID:12447691
• Am Zentrosom phosphoryliert PLK1 Schlüsselsubstrate wie KIZ, NEDD1 und NINL, um die Rekrutierung des γ-Tubulin-Ring-Komplexes und die Bildung der bipolaren Spindel zu fördern. Zugehörige Referenzen: PMID:16980960, PMID:19509060, PMID:12852856
• Während des mitotischen Austritts und der Zytokinese erzeugt PLK1 seine eigenen Dockingstellen auf Zentralspindelproteinen (PRC1, KIF20A/MKLP2) und phosphoryliert ECT2, CEP55 und RACGAP1, um die Bildung der Spaltfurche zu orchestrieren. Zugehörige Referenzen: PMID:12939256, PMID:16247472, PMID:17351640, PMID:19468300, PMID:19468302
• Als kritischer Regulator des G2/M-Kontrollpunkts aktiviert PLK1 CDK1 durch Phosphorylierung von CDC25C, Cyclin B1 und dem Transkriptionsfaktor FOXM1, während es gleichzeitig die negativen Regulatoren WEE1 und PKMYT1/MYT1 hemmt. Zugehörige Referenzen: PMID:11202906, PMID:12447691, PMID:12524548, PMID:19160488
• Am Kinetochor hält PLK1 die Signalisierung des Spindelaufbaukontrollpunkts und die Schwesterchromatidkohäsion durch Phosphorylierung von BUB1B/BUBR1, FBXO5/EMI1, STAG2/SA2 und SGO1 aufrecht. Zugehörige Referenzen: PMID:15148369, PMID:15469984, PMID:17376779, PMID:18331714
• Über die Mitose hinaus trägt PLK1 zur DNA-Schadensreparatur und zum Ausschalten von Kontrollpunkten durch Phosphorylierung von MRE11, RAD51, POLQ und RHNO1 bei und reguliert die p53-Stabilität über den TOPORS-Signalweg negativ. Zugehörige Referenzen: PMID:18615013, PMID:18662541, PMID:37440612, PMID:37674080, PMID:19473992
• PLK1 lokalisiert während der Zellteilung im Kern, am Zentrosom, Kinetochor, an der Spindel und am Midbody und wird in Plazenta und Dickdarm stark exprimiert. Es wird als Phosphoprotein und eine Serin/Threonin-Protein-Kinase mit Rollen im Zellzyklus und der Zellteilung klassifiziert (UniProt KB - P53350).

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches Phosphopeptid um Thr210 hergestellt; daher erkennt er spezifisch die phosphorylierte Form von PLK1. Bestätigen Sie die Signalspezifität durch Behandlung von Lysaten mit λ-Phosphatase oder durch Verwendung nicht-phosphorylierbarer Thr210-Mutanten.
• Für das Western Blotting beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht ~68 kDa, aber mitotisches Phospho-PLK1 kann Mobilitätsverschiebungen aufweisen. Verwenden Sie Lysate von Zellen, die in der Mitose arretiert sind (z. B. durch Nocodazol-Behandlung) als Positivkontrolle und Interphasezellen als Negativkontrolle.
• In ELISA-Anwendungen kann der Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz zur Quantifizierung von Phospho-PLK1 (Thr210)-Spiegeln dienen. Optimieren Sie Beschichtungspuffer, Antikörperkonzentration und Detektionssubstrat für Ihr spezifisches Plattenformat.
• Kreuzreaktivität wurde nur mit humanem PLK1 validiert. Überprüfen Sie bei der Arbeit mit anderen Spezies die Sequenzhomologie um das Thr210-Epitop und bestätigen Sie die Reaktivität experimentell.
• Um die Integrität des Phospho-Epitops zu erhalten, behandeln Sie Proben mit Phosphataseinhibitoren und vermeiden Sie eine langfristige Lagerung von phosphoangereicherten Lysaten.

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