Anti-Phospho-PKC (pan) (gamma)-T514 Kaninchen-pAk für WB und ELISA - P17252 / P05771 / Q05655 / Q02156 / P05129 / P24723 / Q04759

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: PKC (pan) (gamma)-T514 Funktion und Lokalisierung

• Mitglieder der Proteinkinase-C (PKC)-Familie sind Serin/Threonin-Kinasen, die durch Kalzium, Diacylglycerin (DAG) und Phospholipide aktiviert werden und diverse zelluläre Prozesse wie Proliferation, Apoptose, Differenzierung und Migration regulieren.
• PKC alpha (PRKCA), ein weit verbreitetes und repräsentatives Isoform, ist sowohl an der positiven als auch an der negativen Regulation des Zellzyklus beteiligt und kann das Zellwachstum über RAF1/ERK-Signalgebung fördern oder einen Zellstillstand durch CDK-Inhibitoren induzieren.
• Es zeigt anti-apoptotische Funktionen durch Phosphorylierung von BCL2 und Unterdrückung der p53/TP53-vermittelten Aktivierung von IGFBP3 und ist in vielen Krebsarten hochexprimiert, wo es als Tumorpromotor wirken kann.
• Es unterliegt einer stimulationsabhängigen Translokation zwischen Zytoplasma, Zellmembran, mitochondrialer Membran und Zellkern, was eine kontextspezifische Signalgebung ermöglicht.
• In der kardialen Funktion reguliert PKC alpha die Hypertrophie von Kardiomyozyten, die myokardiale Kontraktilität und die Progression von Herzversagen; es phosphoryliert kardiales Troponin T (TNNT2), um die Kalziumempfindlichkeit zu modulieren.
• In der Angiogenese ist es für die Migration von Endothelzellen, die Adhäsion an Vitronectin und die VEGFA-induzierte Signalgebung erforderlich und stabilisiert die VEGFA-m-mRNA post-transkriptionell.
• Dieser Antikörper erkennt spezifisch PKC-Proteine, die am konservierten Threonin-514-Rest phosphoryliert sind (T514 in PKC alpha; äquivalente Aktivierungsschleifenstellen in den Beta-, Delta-, Epsilon-, Gamma-, Eta- und Theta-Isoformen), was für die volle Kinaseaktivität kritisch ist.
• Phosphoryliert KLHL3 an Ser-52 als Reaktion auf Angiotensin-II-Signalgebung, wodurch die Wechselwirkung zwischen KLHL3 und WNK4 verringert wird. Verwandte Referenzen: PMID:25313067
• Phosphoryliert DOCK8, was zu seiner Dissoziation von LRCH1 und der anschließenden Aktivierung der CDC42-GTPase während der chemokininduzierten T-Zell-Migration führt. Verwandte Referenzen: PMID:28028151
• Phosphoryliert LRRK1, welches wiederum an der intrazellulären Trafficking beteiligte RAB-Proteine phosphoryliert. Verwandte Referenzen: PMID:36040231

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid um T514 von menschlichem PKC alpha; dieses Design zielt auf das phosphorylierungsspezifische Epitop über mehrere PKC-Isoformen hinweg ab.
• Für Western Blots fügen Sie Phosphatase-Inhibitoren den Lyse- und Waschpuffern hinzu, um die Phosphorylierung zu erhalten, und erwägen Sie die Verwendung von BSA-basierten Blockierungslösungen, um unspezifische Bindungen zu reduzieren.
• Der ELISA-Nachweis kann an Zell- oder Gewebelysaten durchgeführt werden; optimieren Sie die Beschichtungs- und Nachweisbedingungen für Phosphoproteine und validieren Sie die Spezifität unter Verwendung von nicht-phosphorylierten Peptidkontrollen.
• Da der Antikörper mehrere PKC-Isoformen erkennt, sollten isoformspezifische Reaktionen unter Verwendung relevanter Knockout-Zelllinien oder isoformselektiver Inhibitoren verifiziert werden.
• Die vorhergesagten Banden können je nach Isoform zwischen 59 und 83 kDa liegen; bestätigen Sie das Molekulargewicht im interessierenden ProbenSystem.

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