Anti-Phospho-PDHA1-S293 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB und ELISA - P08559

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: PDHA1-Funktion und -Lokalisierung

• PDHA1 kodiert die somatische Form der Alpha-Untereinheit der Pyruvat-Dehydrogenase E1, einem Schlüsselenzymkomplex, der die cytoplasmatische Glykolyse mit der mitochondrialen Energieproduktion verbindet.
• Zusammen mit PDHB katalysiert der E1-Heterotetramer (α₂β₂) die thiaminpyrophosphat-(TPP)-abhängige Decarboxylierung von Pyruvat und die anschließende reduktive Acetylierung der Lipoyl-tragenden E2-Komponente, ein kritischer Schritt bei der Umwandlung von Pyruvat in Acetyl‑CoA und CO₂. Verwandte Referenzen: PMID:17474719 PMID:19081061 PMID:7782287
• Der PDH-Komplex befindet sich in der mitochondrialen Matrix, wo PDHA1 lokalisiert ist, um eine direkte Kopplung an den Zitronensäurezyklus zu ermöglichen.
• PDHA1 ist in menschlichen Geweben ubiquitär exprimiert, was seiner zentralen Rolle im Glukosestoffwechsel entspricht.
• Das Protein unterliegt regulatorischen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich der Phosphorylierung an mehreren Serinresten und der Acetylierung, welche die enzymatische Aktivität modulieren.
• Krankheitsassoziierte Mutationen in PDHA1 sind mit dem Leigh-Syndrom und anderen primären mitochondrialen Erkrankungen verbunden, was seine metabolische Bedeutung unterstreicht.
• Als Mitglied der Pyruvat-Dehydrogenase-Familie benötigt PDHA1 Thiaminpyrophosphat (Vitamin-B1-Derivat) und Magnesium als Kofaktoren für seine katalytische Aktivität.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Der Antikörper wird gegen ein phosphoryliertes Peptid hergestellt, das den Resten um Ser293 von humanem PDHA1 entspricht. Für optimale Ergebnisse sollten Sie während der Zell-/Gewebe-Lyse Phosphatase-Inhibitor-Cocktails verwenden, um das Phospho-Epitop zu erhalten.
• Beim Western Blotting sollte ein spezifisches Band bei ca. 43 kDa (dem Molekulargewicht von PDHA1) nachweisbar sein. Validieren Sie die Spezifität durch Behandlung der Proben mit Lambda-Phosphatase oder durch Blockierung mit nicht-phosphoryliertem Peptid.
• Für ELISA-Anwendungen sollten Sie in Erwägung ziehen, die Platten mit dem phosphorylierten Immunogen-Peptid als Positivkontrolle und einem nicht-phosphorylierten Gegenstück zu beschichten, um die Phospho-Spezifität zu bestätigen.
• Eine Kreuzreaktivität wird für menschliches, murines und Ratten-PDHA1 berichtet; es wird jedoch empfohlen, die Reaktivität in Ihrem Probenystem zu überprüfen, insbesondere bei der Verwendung von nicht-menschlichen Gewebeextrakten.

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