Anti-Phospho-PAK1/2/3 (S144/S141/S139) Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB und ELISA - Q13153 / Q13177 / O75914

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: PAK1-Funktion und Lokalisierung

• PAK1 (p21-aktivierte Kinase 1, alpha-PAK) ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die zusammen mit PAK2 und PAK3 zur PAK-Familie gehört. Dieser Antikörper erkennt die phosphorylierte Form des konservierten Serinrests, der S144 in PAK1, S141 in PAK2 und S139 in PAK3 entspricht und für die Kinaseaktivierung entscheidend ist.
• Aktiviert durch die Rho-GTPasen CDC42 und RAC1, verbindet PAK1 extrazelluläre Signale mit intrazellulären Pfaden, die Zytoskelettdynamik, Zelladhäsion und Migration steuern.
  Verwandte Referenzen: PMID:8805275 PMID:9528787
• PAK1 reorganisiert das Aktinzytoskelett, indem es die Bildung von Stressfasern und Fokalkontakten fördert und so Zellform und -beweglichkeit reguliert.
  Verwandte Referenzen: PMID:9032240 PMID:9395435
• Die Kinase reguliert die Apoptose über RAF1-Phosphorylierung, die wiederum BAD phosphoryliert und dessen mitochondriale Sequestrierung fördert.
  Verwandte Referenzen: PMID:11733498
• Subzellulär lokalisiert PAK1 im Zytoplasma, an Zellverbindungen, Lamellipodien, Ruffle-Membranen, Invadopodien, im Zellkern und am Zentrosom, was seinen vielfältigen Rollen in der Signalübertragung und Zellstruktur entspricht.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Autophosphorylierung an mehreren Serin/Threonin-Resten (einschließlich S144) und Acetylierung, die Aktivität und Lokalisierung modulieren.
• Klinisch ist PAK1 in Magenkrebs überexprimiert, fördert Invasion und Migration und wurde mit neurologischen Störungen in Verbindung gebracht.
  Verwandte Referenzen: PMID:25766321

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blotting verwenden Sie Protease- und Phosphatase-Inhibitoren-Cocktails während der Zell-/Gewebelyse, um den Phosphorylierungsstatus zu erhalten. Das erwartete Band für PAK1 liegt bei etwa 65 kDa, jedoch können je nach Spezies oder aufgrund posttranslationaler Modifikationen leichte Größenunterschiede auftreten.
• Die Spezifität des Phospho-Signals kann durch Behandlung der Proben mit λ-Phosphatase oder durch Peptid-Konkurrenz-Assays unter Verwendung des nicht-phosphorylierten Immunogen-Peptids bestätigt werden.
• Für ELISA verwenden Sie ein dem Immunogen entsprechendes phosphoryliertes Peptid als Beschichtungsantigen und schließen geeignete Kontrollen (nicht-phosphoryliertes Peptid, Leerwert) ein, um die Antikörperspezifität zu bewerten.
• Da der Antikörper eine konservierte Phospho-Stelle erkennt, die von PAK1/2/3 geteilt wird, ist es ratsam, die Isoform-Identität in Ihrem System mit isoform-spezifischen Gesamt-PAK-Antikörpern oder siRNA-Knockdown zu überprüfen.

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