Anti-Phospho-NFKB1-S893 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für IF/ICC - P19838

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NFKB1-Funktion und -Lokalisation

• NF-κB ist ein pleiotroper Transkriptionsfaktor, der eine Vielzahl biologischer Prozesse reguliert, darunter Entzündung, Immunität, Differenzierung, Zellwachstum, Tumorgenese und Apoptose, und wird in nahezu allen Zelltypen exprimiert.
• Das NFKB1-Gen kodiert für das p105-Vorläuferprotein, das eine Doppelfunktion erfüllt: Es dient als zytoplasmatischer Retentionsfaktor für NF-κB-Komplexe und durchläuft eine cotranslationale Prozessierung, um die aktive p50-Untereinheit zu erzeugen.
  Verwandte Referenzen: PMID:1423592
• Die aktive p50-Untereinheit heterodimerisiert hauptsächlich mit RELA/p65, um den transkriptionell kompetenten NF-κB-Komplex zu bilden, der an die konsensuale κB-DNA-Sequenz 5'-GGRNNYYCC-3' in Enhancer-Regionen von Genen bindet, die an Immun- und Akutphasen-Reaktionen beteiligt sind.
  Verwandte Referenzen: PMID:1740106, PMID:7830764
• Abhängig von der Dimer-Zusammensetzung können NF-κB-Komplexe als transkriptionelle Aktivatoren (z.B. p65-p50) oder Repressoren (z.B. p50-p50-Homodimere) wirken und ermöglichen so eine fein abgestimmte Kontrolle der Genexpression.
• In unstimulierten Zellen wird NF-κB durch IκB-Inhibitorproteine im Zytoplasma zurückgehalten; nach Aktivierung durch verschiedene Stimuli wird IκB phosphoryliert und abgebaut, was die Translokation von NF-κB in den Zellkern ermöglicht.
• Das NFKB1-Protein unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung, Hydroxylierung, S-Nitrosylierung und Ubiquitinierung, die seine Aktivität, Stabilität und Proteininteraktionen regulieren.
• Die Phosphorylierung an Serin 893 (S893) erfolgt innerhalb der C-terminalen, IκB-ähnlichen Domäne von p105, einer Region, die typischerweise während der proteasomalen Prozessierung zu p50 entfernt wird, was auf eine regulatorische Rolle bei der zytoplasmatischen Retention oder Prozessierungsdynamik von p105 hindeutet.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phospho-Peptid, das der Region um S893 des humanen NFKB1 entspricht, was darauf hinweist, dass der Antikörper spezifisch die phosphorylierte Form von NFKB1 an dieser Stelle erkennt.
• Für die Immunzytochemie/Immunfluoreszenz (ICC/IF) empfehlen wir die Verwendung geeigneter Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle, die den Phosphorylierungszustand erhalten. Methanol- oder Paraformaldehyd-Fixierung können geeignet sein; testen Sie jedoch mit und ohne Phosphatase-Inhibitoren.
• Überprüfen Sie die Antikörperspezifität durch Vorinkubation des Antikörpers mit dem Phospho-Peptid-Immunogen oder durch Behandlung der Zellen mit einer Phosphatase vor der Färbung.
• Beachten Sie, dass die S893-Phosphorylierungsstelle in der C-terminalen IκB-ähnlichen Domäne von p105 liegt. Diese Domäne wird während der proteasomalen Prozessierung, die die reife p50-Untereinheit erzeugt, abgebaut. Daher wird erwartet, dass der Antikörper phosphoryliertes p105 (~105 kDa) und nicht das gespaltene p50-Produkt detektiert.
• Da Kreuzreaktivität nur für den Menschen nachgewiesen wurde, validieren Sie den Antikörper in den relevanten humanen Zelllinien oder Geweben. Die Expressionsniveaus können zwischen Zelltypen und Stimulationsbedingungen variieren.

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