Anti-Phospho-NF-κB2-S866 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q00653

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NF-κB2 p100/p52 Funktion und Lokalisierung

• NF-κB2 kodiert das p100-Vorläuferprotein, das proteolytisch verarbeitet wird, um die aktive p52-Untereinheit zu erzeugen; das Isoform p49 wird ebenfalls exprimiert. p100 kann NF-κB-Komplexe im Zytoplasma zurückhalten.
• NF-κB ist ein pleiotroper Transkriptionsfaktor, der Entzündung, Immunität, Zelldifferenzierung, Wachstum, Tumorentstehung und Apoptose reguliert.
• p>p52 bildet Homo- oder Heterodimere mit anderen Mitgliedern der NF-κB/Rel-Familie (RELA/p65, RELB, NFKB1/p50, REL) und bindet an die κB-Konsensussequenz 5'-GGRNNYYCC-3' in den Enhancern der Zielgene.
• Der heterodimere RelB-p52-Komplex fungiert als Transkriptionsaktivator, während der p52-p52-Homodimer als Repressor wirkt.
• Im nicht-kanonischen NF-κB-Signalweg phosphoryliert das von MAP3K14 aktivierte CHUK/IKKA-Homodimer das mit RelB assoziierte p100, was eine ubiquitinabhängige Verarbeitung zu p52 und den nukleären Transport auslöst.
• NF-κB2 ist sowohl im Zytoplasma als auch im Kern lokalisiert, wobei die subzelluläre Kompartimentierung und posttranslationale Modifikationen (Phosphorylierung, Ubiquitinierung) seine Aktivität streng kontrollieren.
• p52 reguliert in Zusammenarbeit mit RELB die zirkadiane Uhr, indem es die Transkriptionsaktivatoraktivität des CLOCK-BMAL1-Heterodimers unterdrückt.
• Chromosomale Umordnungen, die NFKB2 betreffen, sind mit bestimmten lymphoiden Malignartitäten assoziiert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid, das Ser866 umfasst; daher wird erwartet, dass der Antikörper NF-κB2 nur dann spezifisch erkennt, wenn es an diesem Restand phosphoryliert ist. Verwenden Sie während der Probenvorbereitung Phosphatase-Inhibitoren, um die Phosphorylierung zu erhalten.
• Für Western Blotting beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht von p100 ~97 kDa; jedoch können mehrere Bänder aufgrund von Verarbeitungsintermediaten oder Abbau beobachtet werden. Die Einbeziehung geeigneter positiver und negativer Kontrollen (z. B. phosphatasebehandelte Lysate) wird empfohlen.
• Für Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) kann eine Optimierung der Antigen-Rückgewinnung, Permeabilisierung und Blockierungsschritte erforderlich sein. Die Leistung des Antikörpers sollte im entsprechenden Gewebe- oder Zellsystem validiert werden.
• In ELISA-Anwendungen kann der phosphospezifische Antikörper mit einem Fangantikörper gepaart werden, der das gesamte NF-κB2 erkennt, um phosphorylierte Proteinspiegel zu quantifizieren.
• Eine Kreuzreaktivität mit Maus wird berichtet, aber die Reaktivität mit anderen Spezies wurde nicht getestet; eine weitere Validierung wird empfohlen, wenn nicht-menschliche/Maus-Proben verwendet werden.

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