Anti-Phospho-NF-kB p65/RelA-T435 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB und ELISA - Q04206

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NF-kB p65/RelA-Funktion und Lokalisierung

• Kodiert durch das RELA-Gen ist NF-kB p65 (auch bekannt als RelA) eine Untereinheit des NF-kB-Transkriptionsfaktorkomplexes, der eine zentrale Rolle bei der Regulation von Immunantworten, Entzündungen, Zellproliferation und Apoptose spielt.
• NF-kB fungiert als Homo- oder Heterodimer; das RELA-NFKB1-Heterodimer ist die häufigste Form, und das RELA-RELA-Homodimer kann ebenfalls die Transkription an spezifischen Zielgen-Promotoren aktivieren.
• In nicht stimulierten Zellen werden NF-kB-Dimere durch Inhibitor-of-kB (IkB)-Proteine im Zytoplasma zurückgehalten; nach Stimulation wird IkB durch IKK phosphoryliert und abgebaut, was NF-kB ermöglicht, in den Zellkern zu translozieren und die Genexpression zu aktivieren.
• RELA ist essentiell für die Cytokin-Genexpression in T-Zellen und trägt so zu adaptiven Immunantworten bei. Verwandte Referenzen: PMID:15790681
• Es wurde als ein Schlüsseltranskriptionsfaktor identifiziert, der die Interferonantwort während einer SARS-CoV-2-Infektion reguliert. Verwandte Referenzen: PMID:33440148
• RELA unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung (z.B. an Thr435), Acetylierung, Methylierung und anderen, die seine transkriptionelle Aktivität und Interaktionen modulieren.
• Das Protein lokalisiert primär im Zytoplasma in seinem inaktiven Zustand und im Zellkern nach Aktivierung, wo es an DNA bindet und Coaktivatoren rekrutiert.
• Alternatives Spleißen und chromosomale Umlagerungen, die RELA betreffen, wurden mit bestimmten Krankheiten in Verbindung gebracht, was seine Bedeutung sowohl in der normalen Physiologie als auch in der Pathologie unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das zur Erzeugung dieses Antikörpers verwendete Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid um Thr435, daher erkennt es spezifisch die phosphorylierte Form von p65. Stellen Sie für WB sicher, dass Zelllysate mit Phosphataseinhibitoren hergestellt werden, um den Phosphorylierungszustand zu erhalten.
• Bei der Durchführung von ELISA sollten sowohl phosphorylierte als auch nicht-phosphorylierte Peptide verwendet werden, um die Phospho-Spezifität des Antikörpers zu überprüfen.
• Für Western Blot wird eine Bande um 60 kDa erwartet; validieren Sie dies mit positiven Kontrollen, von denen bekannt ist, dass sie aktiviertes NF-kB aufweisen (z.B. TNF-alpha-behandelte Zellen) und negativen Kontrollen (z.B. unbehandelte oder Phosphatase-behandelte Lysate).
• Es wird berichtet, dass der Antikörper mit humanen und murinen Proben reagiert; die Kreuzreaktivität mit anderen Spezies sollte bei Bedarf experimentell evaluiert werden.
• Optimieren Sie die Primärantikörperverdünnungen basierend auf Ihrem Proben-System; typische Ausgangspunkte sind 1:500-1:2000 für WB, aber die genauen Bedingungen können variieren.

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