Anti-Phospho-NF-kB p65/RelA (Ser529) Kaninchen-mAk für WB, ELISA - Q04206

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NF-kB p65/RelA-Funktion und Lokalisierung

• NF-kB p65/RelA ist eine Untereinheit des NF-kappa-B-Transkriptionsfaktorkomplexes, der verschiedene Homo- und Heterodimere bildet; das RELA-NFKB1-Heterodimer ist das häufigste.
• NF-kB reguliert eine breite Palette biologischer Prozesse wie Entzündung, Immunität, Zelldifferenzierung und Apoptose.
• Im inaktiven Zustand wird NF-kB durch I-kappa-B-Inhibitorproteine im Zytoplasma zurückgehalten; nach Stimulation wird I-kappa-B phosphoryliert und abgebaut, was die nukleare Translokation von NF-kB ermöglicht.
• Die Phosphorylierung an bestimmten Resten, einschließlich Ser529, ist eine entscheidende posttranslationale Modifikation, die die transkriptionelle Aktivität, DNA-Bindung und Interaktion mit Cofaktoren von RelA moduliert.
• RelA ist für die Cytokin-Genexpression in T-Zellen essentiell.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:15790681
• RelA fungiert als Schlüsseltranskriptionsfaktor, der die Interferonantwort während einer SARS-CoV-2-Infektion reguliert.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:33440148
• Subzellulär pendelt RelA zwischen Zytoplasma und Zellkern, ein Prozess, der durch Phosphorylierung und Inhibitorbindung streng kontrolliert wird.
• Es unterliegt mehreren posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung, Methylierung und Ubiquitinierung, die seine Aktivität feinabstimmen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Als phospho-spezifischer Antikörper wird empfohlen, Proben während der Aufbereitung mit Phosphataseinhibitoren zu behandeln und die Spezifität des Signals durch Dephosphorylierungskontrollen oder Behandlung mit relevanten Stimuli zu überprüfen.
• Für Western Blot wird ein Band bei etwa 60 kDa für die Vollversion von RelA erwartet; das scheinbare Molekulargewicht kann sich jedoch aufgrund mehrerer Phosphorylierungsereignisse verschieben.
• Für ELISA-Anwendungen kann die Verwendung eines Immunogenpeptids oder eines phosphorylierten Proteinstandards helfen, die Beschichtungskonzentrationen und die Nachweisempfindlichkeit zu optimieren.
• Tests auf Kreuzreaktivität mit nicht-humanen Spezies können gerechtfertigt sein, wenn die Zielsequenz konserviert ist, aber Validierungsdaten liegen nur für humane Proben vor.
• Titrieren Sie den Antikörper stets unter Ihren spezifischen experimentellen Bedingungen, um optimale Arbeitsverdünnungen zu bestimmen.

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