Anti-Phospho-NF-kB p65/RelA (Ser468) Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IP, ELISA - Q04206

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NF-kB p65/RelA Funktion und Lokalisierung

• Der Transkriptionsfaktor p65 (RelA) ist die p65-Untereinheit des NF-kB-Transkriptionsfaktorkomplexes, eines pleiotropen Faktors, der in fast allen Zelltypen vorkommt und als Endpunkt für Signaltransduktionswege dient, die durch verschiedene Reize im Zusammenhang mit Entzündung, Immunität, Differenzierung, Zellwachstum, Tumorentstehung und Apoptose ausgelöst werden.
• NF-kB fungiert als Homo- oder Heterodimer aus Proteinen, die eine Rel-Domäne enthalten. Die häufigste Form ist das RELA-NFKB1 (p65-p50) Heterodimer. Diese Dimere binden mit unterschiedlichen Affinitäten an kappa-B-DNA-Stellen, wobei RELA-NFKB1- und RELA-REL-Komplexe als Transkriptionsaktivatoren wirken.
• Die NF-kB-Aktivität wird durch mehrere Mechanismen reguliert, einschließlich posttranslationaler Modifikationen, subzellulärer Kompartimentierung und Wechselwirkungen mit Kofaktoren oder Korepressoren. Inaktives NF-kB wird durch I-kB-Inhibitorproteine im Zytoplasma zurückgehalten; nach IKK-vermittelter Phosphorylierung und Degradation von I-kB wird der NF-kB-Komplex freigesetzt und wandert in den Zellkern.
• RELA besitzt eine schwache intrinsische DNA-Bindungsaffinität, trägt aber zur DNA-Bindungsfähigkeit des NF-kB-Komplexes bei. Es moduliert auch die Chromatinzugänglichkeit an Zielpromotoren und beeinflusst so indirekt die Genexpression.
• RELA ist für die Cytokin-Genexpression in T-Zellen essentiell und spielt eine zentrale Rolle bei adaptiven Immunantworten. Verwandte Referenzen: PMID:15790681
• Während einer SARS-CoV-2-Infektion fungiert RELA als ein Schlüsseltranskriptionsfaktor, der die Interferonantwort reguliert, was seine Rolle in der antiviralen angeborenen Immunität unterstreicht. Verwandte Referenzen: PMID:33440148
• Subzellulär pendelt RELA zwischen Zytoplasma und Zellkern. Es unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Acetylierung, Methylierung, Phosphorylierung (z. B. an Ser468, das von diesem Antikörper erkannt wird), S-Nitrosylierung und Ubiquitin-ähnlicher Konjugation, die seine Aktivität, Stabilität und Wechselwirkungen modulieren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blot (WB) Lysate mit RIPA-Puffer unter Zusatz von Protease- und Phosphataseinhibitoren herstellen, um das Phosphorylierungssignal bei Ser468 zu erhalten. SDS-PAGE und Transfer durchführen, dann mit dem Antikörper in einer empirisch ermittelten Verdünnung sondieren.
• Bestätigen Sie in Immunpräzipitationsexperimenten (IP), dass der Expressionslevel des Zielproteins in Ihrem Zell- oder Gewebelysat ausreichend ist. Der kaninische Ursprung und die monoklonale Natur des Antikörpers können eine saubere Erfassung mit artgleichen Sekundärreagenzien erleichtern.
• Für den ELISA-basierten Nachweis erwägen Sie, den Antikörper als Einfang- oder Nachweisreagenz zu verwenden, und validieren Sie Linearität und Spezifität in Ihrem Assaysystem mit geeigneten phosphospezifischen Kontrollen.
• Da der Antikörper mit Human, Maus und Ratte kreuzreagiert, kann er für vergleichende Studien über diese Spezies hinweg verwendet werden. Überprüfen Sie die Leistung jedoch stets durch Einbeziehung positiver und negativer Kontrollen für jede Spezies und Behandlungsbedingung.
• Optimieren Sie die Antikörperkonzentration für jede Anwendung und Probentyp, da die empfohlenen Verdünnungen je nach experimentellen Bedingungen und Nachweismethoden variieren können.

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