Anti-Phospho-NF-κB p65/RelA-S536 Kaninchen-poliklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA – Q04206

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation des Transkriptionsfaktors p65

• Die NF-kappa-B p65-Untereinheit (RELA) ist ein zentraler Transkriptionsfaktor der NF-kappa-B-Familie. Sie codiert für ein 60 kDa großes Protein (auch bekannt als p65, NFKB3, CMCU, AIF3BL3) mit entscheidenden Rollen bei Immun- und Stressantworten. UniProt-Eintrag Q04206.
• Der NF-kappa-B-Komplex liegt als Homo- oder Heterodimer vor; das RELA-NFKB1 (p50)-Heterodimer ist am häufigsten vertreten und wirkt als Transkriptionsaktivator, indem es an spezifische κB-DNA-Motive in Genpromotoren bindet.
• Die Aktivierung von NF-kappa-B beinhaltet eine stimulusinduzierte Phosphorylierung und Degradation von IκB-Inhibitoren, wodurch der RELA-Komplex freigesetzt wird und vom Zytoplasma in den Zellkern transloziert. Die Phosphorylierung von RELA an Ser536, die in der Transaktivierungsdomäne liegt, verstärkt seine transkriptionelle Aktivität und ist ein Kennzeichen der kanonischen NF-κB-Aktivierung.
• Die subzelluläre Lokalisation von RELA ist streng reguliert: In ruhenden Zellen ist es überwiegend zytoplasmatisch und an IκB gebunden; nach Induktion reichert es sich im Kern an, um die Expression von Zielgenen zu modulieren. Immunfluoreszenz kann die nukleäre Translokation als Messgröße für die Pfadaktivierung nachweisen.
• RELA wird vielfältig durch Phosphorylierung, Acetylierung, Methylierung, S-Nitrosylierung und Ubiquitinierung modifiziert, wodurch seine transkriptionelle Wirkung feinabgestimmt wird. Es ist essenziell für die Zytokinexpression in T-Zellen (PubMed:15790681) und die Typ-I-Interferonantwort bei einer SARS-CoV-2-Infektion (PubMed:33440148). Verwandte Referenzen: PMID:15790681 PMID:33440148
• Das RELA-Gen codiert für mehrere Isoformen, und seine Aktivität wird durch Interaktionen mit Kofaktoren und Chromatinremodellierern moduliert – dies zeigt die komplexen Regulationsebenen über den einfachen Eintritt in den Kern hinaus.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Bereiten Sie Zell- oder Gewebslysate mit Protease- und Phosphataseinhibitor-Cocktails zu, um die Phosphorylierung an Ser536 zu erhalten. Für das Western Blotting werden Proteine durch SDS-PAGE aufgetrennt und mit diesem Antikörper in einer vom Endnutzer zu validierenden Startverdünnung untersucht; eine starke Bande nahe 60 kDa ist zu erwarten.
• Für Immunfluoreszenz oder Immunzytochemie (IF/ICC) fixieren Sie Zellen mit 4% Paraformaldehyd und sorgen für ausreichende Permeabilisierung; verwenden Sie einen geeigneten Blockierungspuffer, um unspezifische Bindung zu minimieren. Untersuchen Sie die nukleäre Translokation von NF-κB p65 unter inflammatorischen Stimuli (z. B. TNF-α-Behandlung), um das phosphorylationsspezifische Signal zu validieren.
• Bei ELISA-Anwendungen ziehen Sie eine Blockierungskontrolle mit phosphoryliertem Peptid in Betracht, um den phosphorylationsspezifischen Nachweis zu bestätigen. Titrieren Sie den Antikörper, um die optimalen Konzentrationen für Ihren spezifischen Assay zu ermitteln.
• Die Phosphorylierungsdynamik kann je nach Zelltyp variieren; verwenden Sie immer positive und negative Kontrollen (z. B. stimulierte vs. nicht stimulierte Zellen), um Ergebnisse korrekt zu interpretieren.

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