Anti-Phospho-NF-kB p65/RelA (S536) monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - Q04206

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NF-κB p65/RelA-Funktion und Lokalisation

• RELA kodiert den Transkriptionsfaktor p65 (auch bekannt als nuklearer Faktor NF-kappa-B p65-Untereinheit), eine zentrale Untereinheit des NF-κB-Komplexes.
• NF-κB ist ein pleiotroper Transkriptionsfaktor, der Gene bei Entzündungen, Immunität, Zellwachstum, Differenzierung, Tumorbildung und Apoptose kontrolliert und durch verschiedene Stimuli aktiviert wird.
• p65 bildet Homo- oder Heterodimere mit anderen Rel-Proteinen; das RELA-NFKB1-Heterodimer ist das häufigste und aktiviert die Transkription.
• In ruhenden Zellen wird NF-κB durch IκB-Inhibitoren im Zytoplasma zurückgehalten; nach Aktivierung wird IκB abgebaut, wodurch NF-κB freigesetzt wird, um in den Zellkern zu translozieren und an DNA zu binden.
• Die Phosphorylierung an Serin 536 (S536) in der Transaktivierungsdomäne verstärkt die transkriptionelle Aktivierung und dient als Marker für die Aktivierung des NF-κB-Signalwegs.
• p65 ist sowohl im Zellkern als auch im Zytoplasma lokalisiert und pendelt als Reaktion auf Signale.
• p65 unterliegt multiplen posttranslationalen Modifikationen (Phosphorylierung, Acetylierung, Methylierung, Ubiquitinierung, S-Nitrosylierung), die seine Funktion regulieren.
• p65 ist für die Cytokin-Genexpression in T-Zellen essentiell und reguliert die Interferonantwort während einer SARS-CoV-2-Infektion. Verwandte Referenzen: PMID:15790681, PMID:33440148

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid um S536; ziehen Sie die Verwendung einer nicht-phosphorylierten Peptidkontrolle in Betracht, um die Phospho-Spezifität in Ihrem Assay zu bestätigen.
• Für den Western Blot wird eine Hauptbande bei etwa 65 kDa erwartet; validieren Sie die Detektion in stimulierten versus nicht-stimulierten Zelllysaten, um die aktivierungsabhängige Phosphorylierung zu bestätigen.
• Für die Immunfluoreszenz/ICC sollten eine geeignete Permeabilisierung eingeschlossen und eine Mitfärbung mit einem Gesamt-p65-Antikörper oder einem Kernmarker in Betracht gezogen werden, um die Translokation zu visualisieren.
• ELISA-Protokolle können diesen Antikörper zum Einfangen von Phospho-p65 verwenden; optimieren Sie die Beschichtungs- und Detektionsbedingungen für die spezifische Probenmatrix.

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