Anti-Phospho-NCF4 (p40-phox) T154 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB und ELISA - Q15080

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NCF4/p40-phox Funktion und Lokalisierung

• NCF4 kodiert für den Neutrophilen-Zytosol-Faktor 4, auch bekannt als p40-phox, eine essentielle regulatorische Untereinheit des Phagozyten-NADPH-Oxidase-Komplexes.
• Zusammen mit anderen zytosolischen Faktoren ist p40-phox am Zusammenbau und der Aktivierung des NOX2-Enzymkomplexes beteiligt, der Superoxid-Anionen zur Abtötung von Mikroben erzeugt.
• Das Protein enthält eine N-terminale PX-Domäne, die Phosphatidylinositol-3-phosphat bindet und so den Komplex zu phagosomalen und endosomalen Membranen dirigiert.
• Eine zentrale SH3-Domäne vermittelt Interaktionen mit anderen Oxidase-Untereinheiten und erleichtert den Komplexaufbau.
• Die Phosphorylierung an Thr154 ist entscheidend für die Aktivierung, fördert Konformationsänderungen und die Membrantranslokation.
• Exklusiv in hämatopoetischen Zellen exprimiert, spielt NCF4 eine spezialisierte Rolle in der angeborenen Immunabwehr.
• Mutationen in NCF4 sind mit der chronischen granulomatösen Erkrankung (CGD) assoziiert, die durch rezidivierende Infektionen aufgrund defekter Superoxidproduktion gekennzeichnet ist.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Überprüfen Sie die Phospho-Spezifität durch Vorinkubation des Antikörpers mit nicht-phosphoryliertem Peptid oder Behandlung von Zelllysaten mit Phosphatase; Signalverlust bestätigt die Phosphorylierungsabhängigkeit.
• Für Western Blot optimieren Sie die Antikörperverdünnung mit einer positiven Kontrolle, z.B. Phorbolester-stimulierten Neutrophilen- oder HL-60-Zelllysaten; fügen Sie Phosphataseinhibitoren in Lysepuffern zu, um die Phosphorylierung zu erhalten.
• Für ELISA beschichten Sie mit dem phosphorylierten Peptid-Immunogen und vergleichen die Bindung mit dem nicht-phosphorylierten Gegenstück, um die Spezifität zu bewerten.
• Erwägen Sie das Strippen der Membran und erneutes Sondieren mit einem Gesamt-NCF4-Antikörper, um Phosphorylierungsniveaus auf die Proteinmenge zu normalisieren.

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