Anti-Phospho-mTOR-S2448 Kaninchen-Polyclonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P42345

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung der Serin/Threonin-Proteinkinase mTOR

• Die Serin/Threonin-Proteinkinase mTOR (MTOR, auch bekannt als FRAP/FRAP1/FRAP2/RAFT1/RAPT1) ist ein 289 kDa großer Masterregulator des zellulären Stoffwechsels, des Wachstums und des Überlebens, der hormonelle, Nährstoff- und Stresssignale integriert. Verwandte Referenzen: PMID:12087098 PMID:12150925 PMID:12150926
• MTOR fungiert als katalytischer Kern zweier unterschiedlicher Komplexe, mTORC1 und mTORC2, die sich in Untereinheitenzusammensetzung, vorgeschalteter Regulation und nachgeschalteten Zielen unterscheiden. Verwandte Referenzen: PMID:15268862 PMID:15467718 PMID:18497260
• Aktiviertes mTORC1 fördert die Proteinsynthese durch Phosphorylierung von EIF4EBP1, um dessen Hemmung von eIF4E aufzuheben, und durch Phosphorylierung von RPS6KB1/2, um die Phosphorylierung des ribosomalen Proteins S6 und die Translationsinitiation anzutreiben. Verwandte Referenzen: PMID:12087098 PMID:12150925 PMID:12150926 PMID:24403073 PMID:29236692 PMID:18925875
• mTORC1 stimuliert die Lipid- und Nukleotidsynthese durch Aktivierung von SREBF1/SREBP1 bzw. CAD und koordiniert so die Makromolekülproduktion für das Zellwachstum. Verwandte Referenzen: PMID:23429703 PMID:23429704 PMID:23426360
• Bei ausreichender Nährstoffversorgung unterdrückt mTORC1 die Autophagie durch Phosphorylierung wichtiger Autophagie-Regulatoren einschließlich ULK1 (Ser‑758), DAP, RUBCNL und AMBRA1. Verwandte Referenzen: PMID:32561715 PMID:20537536 PMID:30704899 PMID:23524951 PMID:25438055
• Der mTORC2-Komplex phosphoryliert AGC-Kinasen einschließlich AKT an Ser‑473, PKC und SGK1 und reguliert so Zellüberleben, Proliferation und Aktin-Zytoskelett-Reorganisation. Verwandte Referenzen: PMID:15268862 PMID:15467718 PMID:21376236 PMID:15718470 PMID:24670654
• MTOR lokalisiert sich dynamisch an lysosomalen, endoplasmatischen Retikulum-, Golgi-, mitochondrialen und Kernmembranen; die Aktivierung von mTORC1 ist eng an seine Rekrutierung an die lysosomale Oberfläche gekoppelt.
• MTOR wird breit exprimiert, mit höchsten Werten im Hoden, und wird durch ausgedehnte Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung reguliert.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid, das Ser‑2448 umfasst; daher erkennt der Antikörper mTOR nur, wenn er an dieser Stelle phosphoryliert ist. Für den Western Blot behandeln Sie Zellen mit geeigneten Stimuli (z. B. Wachstumsfaktoren, Aminosäuren) und fügen Sie Phosphatase-Inhibitoren zu den Lysepuffern hinzu, um die Phosphorylierung zu erhalten.
• Für das Western Blotting des 289 kDa großen mTOR-Proteins verwenden Sie ein Polyacrylamidgel mit niedrigem Prozentsatz (z. B. 6–8 %) und eine längere Transferzeit. Überprüfen Sie die Transfereffizienz mit einem vorgefärbten Marker.
• Für die Immunfluoreszenz (IF/ICC) fixieren Sie Zellen mit Paraformaldehyd, permeabilisieren Sie angemessen und verwenden Sie einen Blockierungspuffer, um unspezifische Bindung zu reduzieren. Bestätigen Sie die Lokalisierung durch Co-Färbung mit lysosomalen Markern, wenn Sie die Aktivierung von mTORC1 untersuchen.
• ELISA-Anwendungen können die Beschichtung mit Peptid oder Protein beinhalten; validieren Sie die Assay-Bedingungen (BeschichtungsPuffer, Blockierungsmittel, Antikörperverdünnung) in Ihrer spezifischen Matrix.

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