Anti-Phospho-LRRK2-S935 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB und ELISA - Q5S007

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: LRRK2-Funktion und Lokalisierung

• LRRK2 (Leucin-reiche Repeat Serin/Threonin-Protein-Kinase 2), auch bekannt als Dardarin oder PARK8, ist ein großes 286 kDa Multidomänenprotein aus der ROCO-Familie. Es enthält Leucin-reiche Repeats, eine Roc GTPase-Domäne, eine COR-Domäne, eine Kinase-Domäne und WD40-Repeats.

• LRRK2 fungiert als Serin/Threonin-Kinase und GTPase und phosphoryliert eine breite Palette von Substraten, die an neuronaler Plastizität, angeborener Immunität, Autophagie und Vesikeltransport beteiligt sind. Verwandte Referenzen: PMID:17114044 PMID:20949042 PMID:21850687

• Es ist ein Schlüsselregulator von RAB GTPasen, phosphoryliert mehrere RAB-Proteine (einschließlich RAB3, RAB8, RAB10, RAB12, RAB29, RAB35 und RAB43), um deren Membranassoziation und Effektorinteraktionen zu steuern und so den Vesikeltransport und die Ziliogenese zu modulieren. Verwandte Referenzen: PMID:23395371 PMID:26824392 PMID:28720718

• LRRK2 reguliert Autophagie positiv über einen kalziumabhängigen CAMKK/AMPK-Weg und wird zu überlasteten Lysosomen rekrutiert, wo es RAB8A und RAB10 phosphoryliert, um die Freisetzung von Lysosomeninhalten zu fördern. Verwandte Referenzen: PMID:22012985 PMID:30209220 PMID:38227290

• Wirkt als positiver Regulator der angeborenen Immunität, indem es die Phosphorylierung von RIPK2 stromabwärts von NOD1 und NOD2 vermittelt und so die RIPK2-Aktivierung verstärkt. Verwandte Referenzen: PMID:27830463

• Lokalisiert in mehreren zellulären Kompartimenten, einschließlich cytoplasmatischer Vesikel, Golgi-Apparat-Membran, endoplasmatischem Retikulum, Endosomen, Lysosomen, mitochondrialer Außenmembran, synaptischen Vesikeln und Zellfortsätzen wie Axonen und Dendriten.

• Hoch exprimiert im Gehirn, insbesondere in Pyramidenneuronen, dopaminozeptiven Arealen und der Substantia nigra pars compacta; auch exprimiert in Herz, Leber, Lunge, Niere und Immunzellen wie Neutrophilen. Verwandte Referenzen: PMID:29127255

• Mutationen in LRRK2 sind die häufigste genetische Ursache für familiäre Parkinson-Krankheit, wobei pathogene Varianten in den GTPase- und Kinase-Domänen gehäuft auftreten.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Da es sich um einen phospho-spezifischen Antikörper (anti-phospho-S935) handelt, stellen Sie sicher, dass während der Probenvorbereitung Phosphatase-Inhibitoren enthalten sind, um Phosphorylierungssignale zu erhalten.
• Für WB erfordert das hohe Molekulargewicht (286 kDa) angemessene Trennungsbedingungen; erwägen Sie die Verwendung von SDS-PAGE-Gelen mit niedrigem Prozentsatz und verlängerte Transferzeiten.
• Validieren Sie die Spezifität durch Vergleich der Signale zwischen phosphorylierten und nicht-phosphorylierten Formen; Peptidblockierung mit dem immunisierenden Phospho-Peptid kann die Phospho-Spezifität bestätigen.
• Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-LRRK2 (wahrscheinlich die äquivalente Phospho-Stelle) wurde berichtet; überprüfen Sie die Sequenzhomologie der Immunogen-Epitope in diesen Spezies.
• Für ELISA können typische direkte oder Sandwich-Formate verwendet werden; titrieren Sie die Antikörperkonzentration im relevanten Probensystem.

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