Anti-Phospho-JNK1/2/3 (T183/T183/T221) Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P45983 / P45984 / P53779

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von JNK1/JNK2/JNK3

• Mitogen-aktivierte Proteinkinase 8 (MAPK8/JNK1) ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase der c-Jun-N-terminalen Kinase (JNK)-Familie, zu der auch MAPK9/JNK2 und MAPK10/JNK3 gehören. Diese Kinasen werden jeweils von MAPK8, MAPK9 und MAPK10 kodiert und teilen konservierte Phosphorylierungsstellen in der Aktivierungsschleife (Thr183 in JNK1/JNK2 und Thr221 in JNK3).
• JNK1 ist ein zentraler Vermittler des stressaktivierten Proteinkinase (SAP/JNK)-Signalwegs, der durch proinflammatorische Zytokine und physiologischen Stress stimuliert wird. Aktiviertes JNK1 phosphoryliert Transkriptionsfaktoren wie JUN, JDP2 und ATF2 und reguliert dadurch die AP-1-Transkriptionsaktivität (PubMed:18307971).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:18307971
• JNK1 fördert Apoptose durch Phosphorylierung von p53/TP53 und YAP1 (PubMed:21364637). Es unterstützt zudem das Überleben von erythroiden Zellen durch Phosphorylierung von BAD nach EPO-Stimulation (PubMed:21095239) und vermittert durch BCL2-Phosphorylierung die hungerinduzierte Autophagie (PubMed:18570871).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:21364637, PMID:21095239, PMID:18570871
• JNK1 phosphoryliert ein breites Spektrum an Substraten einschließlich CDT1 (PubMed:21856198), HSF4 (PubMed:16581800), SIRT1 (PubMed:17296730), ELK1, ITCH (PubMed:20027304), CLOCK-BMAL1 (PubMed:22441692), NLRP3 (PubMed:28943315) und SIRT6 (PubMed:27568560), was eine Beteiligung an DNA-Replikation, zirkadianen Rhythmen, Inflammasomaktivierung und zellulären Stressantworten nahelegt.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:21856198, PMID:16581800, PMID:17296730, PMID:20027304, PMID:22441692, PMID:28943315, PMID:27568560
• Durch alternatives Spleißen entstehen mehrere JNK1-Isoformen (alpha-1, alpha-2, beta-1, beta-2) mit unterschiedlichen Bindungsaffinitäten für c-Jun und ATF2, obwohl alle Isoformen Substrate mit vergleichbarer Effizienz phosphorylieren.
• JNK1 lokalisiert sich im Zytoplasma, Zellkern und an Synapsen, wodurch es sowohl die nukleäre Transkription als auch zytoplasmatische Prozesse wie die Erfassung synaptischer Vesikel durch SYT4-Phosphorylierung regulieren kann.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Der Antikörper wurde gegen ein synthetisches Phosphopeptid um Thr183 von menschlichem JNK1 erzeugt. Dieser Rest in der Aktivierungsschleife (Thr183 in JNK1/JNK2, Thr221 in JNK3) ist über die drei JNK-Familienmitglieder konserviert, was die in den Spezifikationen angegebene Mehrfachspezifität erklärt.
• Verwenden Sie für Western Blotting Lysepuffer mit Phosphataseinhibitor-Zusatz, um das Phosphorylierungssignal zu erhalten. Die vorhergesagten Molekulargewichte liegen im Bereich von 35–52 kDa, aber die tatsächliche Bandenposition kann aufgrund von Isoformexpression und posttranslationalen Modifikationen abweichen; validieren Sie im entsprechenden Probenystem.
• Bei Immunhistochemie und Immunfluoreszenz kann der phosphospezifische Nachweis eine Antigenrekuperierung und sorgfältige Optimierung der Fixierungs-/Permeabilisierungsbedingungen erfordern. Fügen Sie immer eine Nicht-Phospho-Kontrolle oder eine Phosphatasebehandlung hinzu, um die Signalspezifität zu bestätigen.
• Für ELISA-Anwendungen sollten Sie diesen Antikörper mit einem Gesamt-JNK-Fängerantikörper kombinieren, um die Phosphorylierungslevel relativ zur gesamten Proteinexpression zu quantifizieren.

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