Anti-Phospho-IRS1-S612 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P35568

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: IRS1-Funktion und -Lokalisierung

• Insulin-Rezeptor-Substrat 1 (IRS1) ist ein Signaladapterprotein, das die Signaltransduktion vom Insulinrezeptor (INSR) und Insulin-ähnlichen Wachstumsfaktor-I-Rezeptor (IGF1R) vermittelt und eine kritische Rolle bei Entwicklung, Wachstum, Glukosehomöostase und Lipidstoffwechsel spielt. Verwandte Referenzen: PMID:7541045, PMID:33991522, PMID:38625937, PMID:19639489
• Nach Phosphorylierung durch den Insulinrezeptor fungiert IRS1 als Signalgerüst, das die Insulinwirkung durch Bindung an SH2-Domänen enthaltende Proteine weiterleitet, einschließlich der p85-Regulationseinheit von PI3K, NCK1, NCK2, GRB2 und SHP2. Verwandte Referenzen: PMID:11171109, PMID:8265614
• Die Rekrutierung von GRB2 aktiviert den Ras/Raf/MEK/MAPK-Weg, während die PI3K-Rekrutierung den PI3K/AKT-Weg auslöst und metabolische und mitogene Antworten koordiniert.
• IRS1 wirkt als positiver Regulator des Wnt/Beta-Catenin-Signalwegs durch Unterdrückung der autophagievermittelten Degradation von DVL2, wodurch die Zellproliferation gefördert wird. Verwandte Referenzen: PMID:24616100
• Die subzelluläre Lokalisierung umfasst das Zytoplasma und den Zellkern.
• IRS1 unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung, S-Nitrosylierung und Ubiquitinierung. Dieser Antikörper erkennt spezifisch die Phosphorylierung an Serin 612, eine regulatorische Stelle in der IRS1-Signalisierung.
• Genetische Variationen in IRS1 sind mit einer Anfälligkeit für Diabetes mellitus verbunden.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid um S612; daher wird erwartet, dass der Antikörper spezifisch IRS1 erkennt, das an dieser Stelle phosphoryliert ist. Für Western Blots sollte die Phosphospezifität durch Lambda-Phosphatase-Behandlung oder Phospho-Peptid-Kompetitionsassays bestätigt werden.
• Das vorhergesagte Molekulargewicht von IRS1 beträgt ca. 132 kDa. Führen Sie beim WB einen geeigneten Gelanteil (z. B. 8 % SDS-PAGE) ein und optimieren Sie die Transferbedingungen für hochmolekulare Proteine.
• Die Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte deutet auf eine Konservierung der Epitopsequenz hin; jedoch wird eine Validierung im entsprechenden ProbenSystem empfohlen.
• Für IHC-P ist möglicherweise eine Antigen-Retrieval erforderlich, und die Zugabe von Phosphatase-Inhibitoren während der Gewebeaufbereitung kann helfen, die Phosphorylierung zu erhalten. Die Verdünnung des Primärantikörpers und die Inkubation sollten empirisch optimiert werden.
• In ELISA-Anwendungen wird das Beschichten mit dem phosphorylierten Peptid empfohlen, und der Nachweis kann mit Standardprotokollen für indirekte ELISAs durchgeführt werden.

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