Anti-Phospho-HSL-S563 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q05469

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung der hormonsensitiven Lipase

• Die hormonsensitive Lipase (HSL), kodiert durch das LIPE-Gen, ist eine multifunktionelle Lipase mit breiter Substratspezifität, die Triacylglycerine, Diacylglycerine, Monoacylglycerine, Cholesterinester und Retinylester hydrolysiert (PubMed:15716583, PubMed:15955102, PubMed:19800417).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:15716583
  PMID:15955102
  PMID:19800417

• HSL hydrolysiert bevorzugt Diacylglycerine gegenüber Triacylglycerinen und Monoacylglycerinen, wobei sie die sn-3-Position des Glycerinrückgrats in Diacylglycerinen bevorzugt.

• In Fettgewebe und Herz mobilisiert HSL hauptsächlich gespeicherte Triglyceride in freie Fettsäuren zur Energiegewinnung, während sie in steroidogenen Geweben Cholesterinester in freies Cholesterin für die Steroidhormonproduktion umwandelt.

• HSL katalysiert auch die Hydrolyse von 2-Arachidonoylglycerol, einem Endocannabinoid, und 2-Acetyl-Monoalkylglycerinether, einem Vorläufer in der Synthese des plättchenaktivierenden Faktors.

• Subzellulär lokalisiert sich HSL im Zytosol, in Lipidtropfen und der Zellmembran, einschließlich Höhlen (Caveolae); ihre Translokation wird durch Phosphorylierung reguliert.

• HSL ist ein Phosphoprotein, und seine Aktivität sowie intrazelluläre Lokalisierung werden durch Phosphorylierung an mehreren Resten moduliert; dieser Antikörper erkennt spezifisch HSL, das an Serin 563 phosphoryliert ist.

• Das Protein ist im Hoden stark exprimiert, aber auch in Fettgewebe, Herz und steroidogenen Geweben vorhanden, was seine Schlüsselrollen in der Energiehomöostase und Steroidogenese widerspiegelt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid, das dem Ser563 der Ratten-HSL entspricht; überprüfen Sie die Sequenzalignment mit menschlicher, muriner und Ratten-HSL, um die Kreuzreaktivität sicherzustellen.

• Für Western Blots beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht von HSL ca. 117 kDa; erwägen Sie die Verwendung eines geeigneten Gel-Prozentsatzes und Transferbedingungen für hochmolekulare Proteine.

• Validieren Sie die Spezifität des Antikörpers durch Behandlung der Proben mit Phosphatase oder durch Verwendung von nicht-phosphorylierten Peptidkontrollen.

• Für ELISA optimieren Sie die Beschichtungsbedingungen und fügen einen Phospho-Peptid-Standard hinzu, um die Phosphorylierungsniveaus zu quantifizieren.

• Verwenden Sie geeignete Stimulationsbedingungen (z. B. Isoproterenol für Adipozyten), um die HSL-Phosphorylierung an Ser563 vor der Detektion zu induzieren.

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