Anti-Phospho-Histon H3-S10 polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q16695 / P68431

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Histon H3.1t (H3.4) Funktion und Lokalisierung

• Histon H3.1t (auch bekannt als H3.4, H3/g, kodiert durch das H3-4/HIST3H3-Gen) ist eine testisspezifische Kernhistonvariante, die während der Spermatogenese kanonisches Histon H3 in Nukleosomen ersetzt.
• Als Kernkomponente des Nukleosoms wickelt und verdichtet Histon H3.1t DNA zu Chromatin und schränkt so den Zugang für Transkriptions-, Reparatur- und Replikationsmaschinerien ein.
• Die H3-Genfamilie umfasst mehrere replikationsabhängige (wie HIST1H3 und HIST2H3) und replikationsunabhängige Varianten (H3.3), wobei H3.1t ein gewebespezifisches Mitglied ist.
• Histon H3.1t ist im Zellkern lokalisiert und ein Bestandteil des chromosomalen Chromatins, wo es umfangreichen posttranslationalen Modifikationen (PTMs) unterliegt, einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung, Methylierung und Ubiquitinierung, die zusammenfassend als Histon-Code bezeichnet werden.
• Die Phosphorylierung von Histon H3 an Serin 10 (H3S10ph) ist ein wichtiger mitotischer Marker, der mit Chromosomenkondensation assoziiert ist, und spielt auch eine Rolle bei der transkriptionellen Aktivierung von Immediate-Early-Genen.
• Die Gewebespezifität von H3.1t für Hodenzellen deutet auf eine spezialisierte Funktion beim Chromatin-Remodeling während der Spermatogenese hin, die möglicherweise zur männlichen Fruchtbarkeit beiträgt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches Phospho-Peptid, das Ser10 von humanem Histon H3 entspricht, hergestellt. Um eine phosphorylierungsspezifische Detektion sicherzustellen, sollten in der Western-Blot-Analyse Phosphatase-behandelte oder unstimulierte Zelllysate als negative Kontrollen verwendet werden.
• Für die Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) können Permeabilisierungs- und Antigen-Retrieval-Schritte erforderlich sein; optimieren Sie Fixierungs- und Blockierungsbedingungen, um das Phosphorylierungs-Epitop zu erhalten.
• Die vorhergesagte breite Kreuzreaktivität zwischen Spezies deutet darauf hin, dass der Antikörper Phospho-H3-S10 bei Wirbeltieren detektieren kann; eine Validierung mit positiven und negativen Kontrollproben für jede Spezies wird jedoch empfohlen.
• Angesichts des geringen Molekulargewichts von Histon H3 (~15 kDa) verwenden Sie SDS-PAGE-Gele mit hohem Prozentanteil (z.B. 15 %) und geeignete Membranporengrößen (0,2 µm) für einen effizienten Transfer und Nachweis.
• Für ELISA- und IF-Anwendungen sollte der Antikörper titriert werden, um die optimale Arbeitsverdünnung zu bestimmen, da die absoluten Konzentrationen für dieses Produkt nicht empirisch bestimmt wurden.

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