Anti-Phospho-FAK-Y925 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q05397

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: FAK-Funktion und -Lokalisierung

• Fokale Adhäsionskinase 1 (FAK/PTK2) ist eine nicht-rezeptorgebundene Tyrosinkinase, die als kritischer Regulator der Zellmigration, Adhäsion, Ausbreitung und Reorganisation des Aktin-Zytoskeletts dient. Sie integriert Signale von Integrinen, Wachstumsfaktorrezeptoren und G-Protein-gekoppelten Rezeptoren.
• FAK unterliegt nach Aktivierung einer Autophosphorylierung bei Y397, wodurch eine hochaffine Bindungsstelle für SRC-Familienkinasen entsteht. Eine nachfolgende Phosphorylierung bei Y925 fördert die Rekrutierung von GRB2, verknüpft dies mit der MAP-Kinase/ERK-Signalkaskade und trägt zur Zellproliferation und zum Überleben bei.
• Das Protein lokalisiert sich dynamisch zu fokalen Adhäsionen, der Zellmembran, dem perinukleären Zytoplasma, dem Zellcortex, dem Zentrosom und dem Zellkern. Diese Verteilung ermöglicht eine räumliche und zeitliche Kontrolle der Signaltransduktion und des Zytoskelettumbaus.
• FAK phosphoryliert multiple Substrate, einschließlich NEDD9 (Verstärkung der integrinvermittelten Signalgebung), BCAR1, GRB7 und SRC selbst, und moduliert so Downstream-Wege wie die PI3K/AKT- und Rho-GTPase-Kaskaden. Verwandte Referenzen: PMID:9360983
• Isoform 6 (FRNK), ein alternativ gespleißtes Variant ohne Kinasedomäne, wirkt als endogener Inhibitor, indem es die FAK-Phosphorylierung und Kernsignalgebung blockiert und die SRF-abhängige Transkription abschwächt.
• FAK ist ubiquitär exprimiert, mit nachweisbarer Präsenz in B- und T-Lymphozyten, Lungenfibroblasten und Epithelzellen. Verwandte Referenzen: PMID:31630787
• Posttranslationale Modifikationen, insbesondere die Phosphorylierung an den Resten Y397, Y576, Y577, Y861 und Y925, regulieren die FAK-Aktivität streng. Die Phosphorylierung bei Y925 steuert spezifisch die Interaktion mit GRB2 und die Aktivierung des MAPK-Weges, was sie zu einem Schlüsselmarker für die FAK-Signalgebung in Entwicklungs- und Krebskontexten macht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid, das Tyrosin 925 von humanem FAK umgibt; der Antikörper wird erwartet, FAK nur dann zu erkennen, wenn es an dieser Stelle phosphoryliert ist. Für optimale Spezifität im WB sollten Sie während der Probenvorbereitung Phosphatase-Inhibitoren verwenden, um die Phosphorylierung zu erhalten.
• Vorhergesagtes Molekulargewicht: ~119 kDa. Eine Bande in der Nähe dieser Größe in humanen Zelllysaten unterstützt die Detektion, aber zusätzliche Bänder durch Isoformen oder posttranslationale Modifikationen können auftreten; vergleichen Sie daher mit totalen FAK-Kontrollen.
• Für ELISA sollten Sie ein nicht-phosphoryliertes Peptid als Kontrolle einschließen, um die Phospho-Spezifität zu bestätigen. Titrieren Sie die Antikörperkonzentration, um den Hintergrund zu minimieren und das Signal-Rausch-Verhältnis unter Ihren spezifischen Assay-Bedingungen zu maximieren.
• Dieses Produkt hat dokumentierte Reaktivität mit humanen Proben; die Kreuzreaktivität mit anderen Spezies ist unbekannt. Validieren Sie die Leistung in jedem nicht-humanen Modellsystem mit geeigneten positiven und negativen Kontrollen.

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