Anti-Phospho-eNOS (S1177) Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - P29474

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: eNOS-Funktion und -Lokalisierung

• eNOS (Stickstoffmonoxid-Synthase 3) katalysiert die Produktion von Stickstoffmonoxid (NO), das als Vasodilatator durch cGMP-vermittelte Entspannung der glatten Muskulatur wirkt. Verwandte Referenzen: PMID:1378832
• Das von eNOS produzierte NO ist auch entscheidend für die VEGF-vermittelte Angiogenese und die Thrombozytenaktivierung und verknüpft die endotheliale Funktion mit der Gesundheit des Kreislaufsystems.
• Alternatives Spleißen erzeugt eine dominant-negative Isoform, die mit dem vollständigen Enzym einen Heterodimer bilden kann, was möglicherweise die eNOS-Aktivität herunterreguliert.
• eNOS ist in Höckern (Caveolae) der Plasmamembran, dem Golgi-Apparat und dem Zytoskelett lokalisiert, was eine kompartimentierte NO-Signalübertragung ermöglicht.
• Das Protein unterliegt mehreren posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung an Ser1177 (verbunden mit Aktivierung), Myristoylierung und Palmitoylierung, die seine subzelluläre Zielrichtung und Aktivität regulieren.
• eNOS-Expression wird in Thrombozyten, Plazenta, Leber und Niere nachgewiesen, wobei vaskuläre Endothelzellen ein primärer Funktionsort sind.
• Das Enzym benötigt mehrere Kofaktoren: Häm, FAD, FMN, NADPH und Zink und bindet Calmodulin in einer calciumabhängigen Weise zur Aktivierung.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid, das dem Ser1177-Bereich entspricht, was darauf hindeutet, dass der Antikörper die phosphorylierte Form von eNOS an dieser Stelle erkennt.
• Für den Western Blot sollten Sie die Verwendung von Phosphatase-Inhibitoren in Lysepuffern in Betracht ziehen, um die Phosphorylierung zu erhalten, und die Bandspezifität mithilfe von phosphatasebehandelten Kontrollen validieren.
• ELISA-Anwendungen erfordern möglicherweise eine Optimierung der Beschichtungs- und Detektionsbedingungen; testen Sie eine Reihe von Antikörperverdünnungen und Blockierungsmitteln.
• Validieren Sie die Spezifität in relevanten menschlichen Zell- oder Gewebelysaten, da eine Kreuzreaktivität mit anderen Spezies nicht angegeben ist; fügen Sie geeignete positive und negative Kontrollen hinzu.

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