Anti-Phospho-eNOS-S1177 Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P29474

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: eNOS-Funktion und Lokalisierung

• eNOS (Stickstoffmonoxid-Synthase 3) ist ein konstitutiv exprimiertes Enzym, das die Produktion von Stickstoffmonoxid (NO) katalysiert, einem kritischen Signalmolekül, das an der Entspannung der glatten Gefäßmuskulatur über einen cGMP-vermittelten Weg und an VEGF-induzierter Angiogenese beteiligt ist. Verwandte Referenzen: PMID:1378832
• NO, das von eNOS produziert wird, spielt auch eine Rolle bei der Thrombozytenaktivierung und der Regulation der Blutgerinnung.
• Das Enzym lokalisiert an der Plasmamembran, in Caveolae, im Zytoplasma, im Zytoskelett und im Golgi-Apparat, was seine dynamische subzelluläre Regulation widerspiegelt.
• eNOS wird in Thrombozyten, Plazenta, Leber und Niere exprimiert.
• Alternatives Spleißen erzeugt eine dominant-negative Isoform, der die eNOS-Aktivität fehlt und die die eNOS-Funktion durch Bildung von Heterodimeren mit Isoform 1 herunterregulieren kann.
• Zu den wichtigsten posttranslationalen Modifikationen gehören die Phosphorylierung an Ser1177 (das von diesem Antikörper erkannte Epitop) sowie Myristoylierung und Palmitoylierung zur Membranverankerung.
• Die eNOS-Aktivität hängt von Cofaktoren wie Häm, FAD, FMN, NADP, Calmodulin und Metallen wie Kalzium und Zink ab.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blotting geeignete Kontrollen (z. B. unstimulierte vs. stimulierte Endothelzellen) und Phosphataseinhibitoren einschließen, um die Phospho-Spezifität zu überprüfen und eine Dephosphorylierung zu verhindern.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) den Antikörper in Paraffin-eingebetteten Schnitten unter Verwendung von Antigen-Retrieval validieren und eine parallele Färbung mit einem phosphorylierungsunabhängigen eNOS-Antikörper durchführen, um die Spezifität zu beurteilen.
• Für ELISA-Anwendungen kann der Antikörper zum Einfangen oder Detektieren von Phospho-eNOS (Ser1177) in Zelllysaten oder rekombinanten Proteinpräparationen verwendet werden; zur Normalisierung sollte ein Total-eNOS-Antikörper in Betracht gezogen werden.
• Das vorhergesagte Molekulargewicht von eNOS beträgt etwa 133 kDa; verwenden Sie geeignete Molekulargewichtsmarker und Gel-Prozentsätze für eine klare Auflösung.
• Eine Kreuzreaktivität wurde für Human und Maus berichtet; bei Verwendung anderer Spezies führen Sie eine Sequenzalignment durch, um die Epitop-Konservierung zu beurteilen, und validieren Sie die Reaktivität empirisch.

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