Anti-Phospho-eIF4EBP1-T36 Poliklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q13541

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von eIF4EBP1

• Das eukaryotische Translationsinitiationsfaktor 4E-Bindeprotein 1 (eIF4EBP1), auch bekannt als PHAS-I, ist ein zentraler Repressor der cap-abhängigen Translationsinitiation.
• In seinem hypophosphorylierten Zustand bindet eIF4EBP1 fest an eIF4E, verhindert die Bildung des eIF4F-Komplexes und hemmt die Translation.
• Die Phosphorylierung an mehreren Stellen, einschließlich Thr36, führt zu hyperphosphoryliertem eIF4EBP1, das sich von eIF4E löst und dadurch die Translation ermöglicht.
• eIF4EBP1 integriert Signale verschiedener Wachstumsfaktoren und Hormone über die MAP-Kinase- und mTORC1-Signalwege und reguliert die Proteinsynthese als Antwort auf extrazelluläre Reize.
• Subzellulär ist eIF4EBP1 sowohl im Zytoplasma als auch im Kern zu finden und shuttle zwischen den Kompartimenten, um die Verfügbarkeit von eIF4E zu regulieren.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung, die seine Aktivität und Stabilität modulieren.
• Als kritischer Knotenpunkt in der PI3K/AKT/mTOR-Signalachse ist eIF4EBP1 an Zellwachstum, Proliferation und Stoffwechsel beteiligt, was es zu einem Biomarker für Krebserkrankungen und Stoffwechselstörungen macht.

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Da das Immunogen ein Phosphopeptid spezifisch für Thr36 von eIF4EBP1 ist, überprüfen Sie die phosphorylierungsabhängige Bindung durch Behandlung von Proben mit Phosphatase oder durch Verwendung nicht phosphorylierter Peptidkonkurrenz.
• Für das Western Blotting kann eine Bande bei etwa 13-15 kDa nachgewiesen werden; beachten Sie, dass Phosphorylierung aufgrund verschiedener Phosphorylierungszustände oft zu mehreren Banden führt.
• Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-eIF4EBP1 ist angegeben; bestätigen Sie jedoch die Sequenzhomologie um Thr36 und validieren Sie in relevanten Zelllinien oder Geweben.
• Berücksichtigen Sie die Einbeziehung geeigneter Positivkontrollen, wie Lysate aus insulin- oder serumstimulierten Zellen, um phosphorylierungsabhängige Signale zu beobachten.
• Für ELISA kann die Immobilisierung von Phosphopeptid und die Detektion mit einem Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper optimiert werden; stellen Sie sicher, dass Blockierschritte unspezifische Bindung reduzieren.
• Vermeiden Sie Gefrier-Auftau-Zyklen und lagern Sie den Antikörper entsprechend, wie durch die Versandbedingung mit Eispackung angegeben.

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