Anti-Phospho-eIF4EBP1-S65 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q13541

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von eIF4EBP1

• eIF4EBP1 (Eukaryotischer Translationsinitiationsfaktor 4E-bindendes Protein 1), auch bekannt als PHAS-I (phosphoryliertes, durch Hitze und Säure stabiles, durch Insulin reguliertes Protein 1), ist ein Schlüsselrepressor der cap-abhängigen Translationsinitiation.
• In seinem hypophosphorylierten Zustand konkurriert 4E-BP1 mit eIF4G um die Bindung an eIF4E und verhindert so die Assembly des eIF4F-Komplexes und hemmt die Translation. Hyperphosphorylierung, beispielsweise bei Ser65, fördert die Dissoziation von eIF4E und ermöglicht den Fortgang der cap-abhängigen Translation.
• 4E-BP1 integriert Signale von Wachstumsfaktoren, Hormonen und Nährstoffen über die MAP-Kinase- und mTORC1-Signalwege, wobei die durch mTORC1 vermittelte Phosphorylierung an mehreren Stellen (einschließlich Thr37/46, Ser65 und Thr70) für seine Inaktivierung entscheidend ist.
• 4E-BP1 gehört zur Familie der eIF4E-bindenden Proteine und teilt ein konserviertes eIF4E-Bindungsmotiv (YXXXXLΦ), das direkt mit der dorsalen Oberfläche von eIF4E interagiert.
• Die subzelluläre Lokalisierung ist primär zytoplasmatisch, aber 4E-BP1 kann in den Kern shuttle, wo es die nukleäre Translation oder andere Funktionen regulieren kann. Die Dynamik der kompartimentierten Phosphorylierung kann variieren.
• Neben der Phosphorylierung unterliegt 4E-BP1 Acetylierung, Ubiquitinierung (Isopeptidbindungsbildung) und anderen posttranslationalen Modifikationen, die seine Stabilität und Aktivität feinabstimmen, was es als Phosphoprotein und Ziel von ubiquitinähnlicher Konjugation klassifiziert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid, das Ser65 umgibt, sodass die Reaktivität des Antikörpers phosphospezifisch erwartet wird. Für ELISA sollte erwogen werden, den Antikörper mit einem nicht-phosphorylierten Peptid zu präinkubieren, um die Phosphospezifität zu bestätigen.
• Führen Sie beim Western Blot eine Detektion des gesamten 4E-BP1 (unter Verwendung eines Pan-Antikörpers) durch, um sowohl die Gesamtproteinmenge als auch den Phosphorylierungsstatus zu überwachen. Verwenden Sie geeignete Phosphatase-Inhibitoren in Lysepuffern.
• Der Antikörper erkennt humanes 4E-BP1. Validieren Sie die Leistung in menschlichen Zelllinien oder Gewebeproben; Reaktivitäten mit anderen Spezies wurden nicht berichtet, daher wird bei Anwendung auf nicht-menschliche Proben eine Kreuzreaktivitätsprüfung empfohlen.
• Da es sich um einen polyklonalen Kaninchen-Antikörper handelt, sollte die Chargen-zu-Chargen-Konsistenz überwacht werden; Pilotexperimente mit der spezifischen Charge werden empfohlen.

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