Anti-Phospho-EGFR-Y845 Monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P00533

Kern-Produktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: EGFR-Funktion und -Lokalisierung

• EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor), auch bekannt als ErbB-1 oder HER1, ist ein Transmembran-Rezeptor-Tyrosinkinase, der zur ERBB-Familie gehört. Ein alternativ gespleißtes Isoform (Isoform 2) kann als Antagonist der EGF-Wirkung fungieren.
• Als Rezeptor-Tyrosinkinase bindet EGFR verschiedene Liganden der EGF-Familie und löst intrazelluläre Signalkaskaden aus, die extrazelluläre Signale in geeignete zelluläre Antworten umwandeln, einschließlich Proliferation, Differenzierung und Überleben (PubMed:10805725, PubMed:27153536, PubMed:2790960). Verwandte Referenzen: PMID:10805725 PMID:27153536 PMID:2790960
• Bekannte Liganden umfassen EGF, TGFA/TGF-alpha, AREG, Epigen/EPGN, BTC/Betacellulin, Epiregulin/EREG und HBEGF/heparin-bindenden EGF (PubMed:12297049, PubMed:15611079, PubMed:17909029). Verwandte Referenzen: PMID:12297049 PMID:15611079 PMID:17909029
• Die Ligandenbindung induziert Homo- und/oder Heterodimerisierung des Rezeptors und anschließende Autophosphorylierung an wichtigen zytoplasmatischen Tyrosinen. Das phosphorylierte Tyrosin 845 (Y845), das in der Aktivierungsschleife der Kinasedomäne liegt, ist entscheidend für die Stabilisierung der aktiven Konformation und die Verstärkung der katalytischen Aktivität.
• Die Autophosphorylierung führt zur Rekrutierung von Adapterproteinen wie GRB2, wodurch mehrere Downstream-Module aktiviert werden, darunter RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCgamma-PKC, STATs und möglicherweise NF-kappa-B (PubMed:11116146, PubMed:27153536). Verwandte Referenzen: PMID:11116146 PMID:27153536
• EGFR phosphoryliert direkt andere Proteine, wie RGS16 (Aktivierung seiner GTPase-Aktivität) und MUC1 (Verstärkung seiner Interaktion mit SRC und Beta-Catenin) (PubMed:11602604, PubMed:11483589). Verwandte Referenzen: PMID:11602604 PMID:11483589
• Es reguliert die Zellmigration positiv durch Interaktion mit CCDC88A/GIV, das EGFR nach Ligandenstimulation an der Zellmembran zurückhält (PubMed:20462955). Verwandte Referenzen: PMID:20462955
• EGFR lokalisiert hauptsächlich an der Zellmembran, wird aber auch im endoplasmatischen Retikulum, im Golgi-Apparat, im Zellkern, in Endosomen gefunden und kann in Exosomen sezerniert werden. Er ist ubiquitär exprimiert, wobei Isoform 2 bemerkenswert häufig in Eierstockkrebs nachgewiesen wird.
• Neben seinen normalen physiologischen Rollen fungiert EGFR als Wirtszellrezeptor für den Eintritt des Hepatitis-C-Virus (HCV), vermittelt die Bildung des CD81-CLDN1-Korezeptorkomplexes und verstärkt die virale Membranfusion.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Da dieser Antikörper ein phosphorylierungsabhängiges Epitop erkennt, fügen Sie Phosphatase-Inhibitoren den Lysis-Puffern hinzu und behandeln Sie Proben schnell bei niedrigen Temperaturen, um das Phosphorylierungssignal zu bewahren.
• Für Western Blot ist ein Hauptband um 134 kDa zu erwarten. Um die Phospho-Spezifität zu bestätigen, sollten Sie Zelllysate mit Lambda-Phosphatase behandeln oder Peptid-Wettbewerbsassays mit dem nicht-phosphorylierten Gegenstück des Immunogen-Peptids durchführen.
• Bei der Immunfluoreszenz/ICC ist ein vorwiegend membranassoziiertes Färbemuster zu erwarten; eine Co-Färbung mit einem Plasmamembran-Marker kann helfen, die Lokalisierung zu bestätigen.
• Für ELISA-Anwendungen kann der Antikörper zum Einfangen oder Nachweis von phosphoryliertem EGFR verwendet werden; optimieren Sie Beschichtungs- und Nachweisbedingungen empirisch.
• Validiert für Reaktivität mit Human; für andere Spezies überprüfen Sie die Sequenzhomologie um Y845 und die Kreuzreaktivität experimentell.

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