Anti-Phospho-EGFR-Y1173 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - P00533

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: EGFR-Funktion und -Lokalisierung

• Der Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) ist eine Rezeptor-Tyrosinkinase, die an Liganden der EGF-Familie bindet und multiple Signalkaskaden aktiviert, darunter RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCγ-PKC und STAT-Module, um zelluläre Antworten wie Proliferation, Migration und Überleben zu regulieren. Verwandte Referenzen: PMID:27153536, PMID:10805725, PMID:2790960
• Nach Ligandenbindung unterzieht sich der EGFR einer Homo- oder Heterodimerisierung und einer Autophosphorylierung an Schlüssel-Tyrosinresten im Zytoplasma, einschließlich Y1173, wodurch Andockstellen für Adaptorproteine wie GRB2 geschaffen werden, welche die Downstream-Signalisierung weiterleiten. Verwandte Referenzen: PMID:12297049, PMID:15611079
• EGFR kann auch Substrate wie RGS16 und MUC1 direkt phosphorylieren und nimmt an der NF-kappa-B-Signalisierung teil, was ihn mit Wegen der G-Protein-gekoppelten Rezeptoren und der Zelladhäsion verbindet. Verwandte Referenzen: PMID:11602604, PMID:11483589, PMID:11116146
• Isoform 2 von EGFR kann als Antagonist der EGF-Wirkung fungieren und ist bemerkenswert in Eierstockkrebsen exprimiert.
• EGFR lokalisiert primär an der Zellmembran, aber auch im endoplasmatischen Retikulum, im Golgi-Apparat, im Zellkern, in Endosomen und kann sezerniert werden, was seine dynamische Trafficking- und Signalisierungsrollen widerspiegelt.
• Schlüssel-posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung (an Tyrosin, Serin, Threonin), Glykosylierung, Ubiquitinierung und Palmitoylierung, die seine Aktivität, Stabilität und Interaktionsnetzwerke regulieren.
• Ubiquitär exprimiert, spielt EGFR eine Rolle bei Entwicklung, Gedächtnis, Lernen und Schmerzsignalisierung; seine Dysregulation wird mit verschiedenen Krebsarten in Verbindung gebracht.
• EGFR dient auch als Wirtszellrezeptor für den Eintritt des Hepatitis-C-Virus (HCV) und erleichtert die Virusinternalisierung in Hepatozyten.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid, das spezifisch für Y1173 des humanen EGFR ist. Für den Western Blot wird die Verwendung von phosphospezifischen Lysespuffern und Phosphatasehemmern empfohlen, um den Phosphorylierungszustand während der Probenvorbereitung zu erhalten.
• Da EGFR nach Ligandenstimulation stark phosphoryliert wird, kann die Behandlung von Zellen mit EGF vor der Ernte die Signaldetektion im WB verstärken; umgekehrt können Serumhungern und/oder eine Phosphatasebehandlung verwendet werden, um die Phosphospezifität zu verifizieren.
• Für ELISA sollte in Betracht gezogen werden, den Antikörper in einem Sandwich-Format mit einem Anti-Gesamt-EGFR-Fangantikörper zu verwenden, um Phospho-EGFR-Spiegel in Zelllysaten oder Gewebeextrakten zu quantifizieren.
• Eine Kreuz-Adsorption mit dem nicht-phosphorylierten Peptid kann durchgeführt werden, um die Phosphospezifität sowohl im WB als auch im ELISA zu bestätigen.

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