Anti-Phospho-EGFR (T669) Polyklonaler Antikörper für WB, IP, ELISA - P00533

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: EGFR-Funktion und -Lokalisierung

• EGFR ist eine Rezeptor-Tyrosinkinase, die an EGF-Familienliganden (EGF, TGFA, AREG usw.) bindet, was zur Homo- oder Heterodimerisierung des Rezeptors und zur Autophosphorylierung an wichtigen cytoplasmatischen Resten führt und dadurch mehrere Signalkaskaden auslöst. Verwandte Referenzen: PMID:10805725, PMID:27153536, PMID:2790960, PMID:12297049, PMID:15611079, PMID:17909029
• Autophosphorylierter EGFR rekrutiert Adapterproteine wie GRB2 und aktiviert mindestens vier wichtige nachgeschaltete Signalwege: RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCgamma-PKC und STAT-Module, die Zellproliferation, -überleben und -migration regulieren. Verwandte Referenzen: PMID:27153536
• EGFR phosphoryliert direkt andere Signalproteine, wie RGS16 (Aktivierung seiner GTPase-Aktivität) und MUC1 (Erhöhung seiner Interaktion mit SRC und beta-Catenin), und koppelt so an G-Protein-gekoppelte Rezeptorsignale und Zelladhäsionsprozesse. Verwandte Referenzen: PMID:11602604, PMID:11483589
• Die Phosphorylierung an Threonin 669 (T669) ist ein entscheidendes regulatorisches Ereignis, das die EGFR-Kinaseaktivität und die nachgeschaltete Signalübertragung moduliert und oft mit Rezeptoraktivierung und Signaltransduktion assoziiert ist.
• Isoform 2 von EGFR kann als natürlicher Antagonist der EGF-Wirkung fungieren und bietet eine zusätzliche Ebene der Signalregulation.
• EGFR wird auch als Wirtszellrezeptor für den Eintritt des Hepatitis-C-Virus genutzt und erleichtert die Bildung von CD81-CLDN1-Rezeptorkomplexen.
• Subzellulär ist EGFR an der Zellmembran, im endoplasmatischen Retikulum, im Golgi-Apparat, im Zellkern und in Endosomen lokalisiert, wobei der Transport zwischen diesen Kompartimenten das Signalausgabe beeinflusst.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid um T669; um die Phosphorylierungsspezifität zu bestätigen, behandeln Sie Proben mit Lambda-Phosphatase und beobachten Sie den Signalverlust im Western Blot.
• Für WB: Verwenden Sie eine hochwertige Proteinleiter im Bereich von 130-140 kDa und schließen Sie geeignete Ladekontrollen ein. Validieren Sie den Antikörper in Ihrer Zielzelllinie mit bekannter EGFR-Expression.
• Bei IP-Experimenten: Optimieren Sie das Antikörper-zu-Lysat-Verhältnis und bestätigen Sie die erfolgreiche Immunpräzipitation durch Co-Immunpräzipitation bekannter EGFR-Interaktionspartner oder durch Blotten mit einem pan-EGFR-Antikörper.
• ELISA-Protokolle erfordern möglicherweise das Beschichten mit dem phosphorylierten Peptid oder dem Voll-Längen-Protein; führen Sie Schachbretttitrationen durch, um die optimalen Antikörper- und Antigenkonzentrationen zu bestimmen.
• Die Kreuzreaktivität ist auf humanes EGFR beschränkt; wenn Sie mit Maus- oder Rattenproben arbeiten, validieren Sie die Kreuzreaktivität experimentell oder ziehen Sie spezies-spezifische Reagenzien in Betracht.
• Als Kaninchen-Polyklonalantikörper: Verwenden Sie einen geeigneten Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper für den Nachweis; beachten Sie, dass sich polyklonale Chargen unterscheiden können, daher sollte jede neue Charge titriert werden.

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