Anti-Phospho-Chk1 (S280) monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - O14757

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung der Serin/Threonin-Proteinkinase Chk1

• Die Serin/Threonin-Proteinkinase Chk1 (CHEK1) ist eine kritische Kinase für den Checkpoint-vermittelten Zellzyklusarrest und die DNA-Reparatur. Eine alternativ gespleißte Isoform (Isoform 2) wirkt als endogener Repressor von Isoform 1 und antagonisiert deren Funktion.
• Erforderlich für die DNA-Schadensantwort: erkennt die Substrat-Konsensussequenz [R-X-X-S/T] und phosphoryliert CDC25A, CDC25B und CDC25C, wodurch 14-3-3-Bindungsstellen entstehen, die diese Phosphatasen hemmen und/oder den Abbau von CDC25A fördern, was zu inhibitorischer Tyrosin-Phosphorylierung von CDK-Cyclin-Komplexen und Zellzyklusarrest führt. Verwandte Referenzen: PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:9278511
• Phosphoryliert RAD51 an Thr-309, fördert dessen Freisetzung von BRCA2 und verstärkt die Chromatin-Assoziation, wodurch die DNA-Reparatur durch homologe Rekombination erleichtert wird. Verwandte Referenzen: PMID:15665856
• Phosphoryliert mehrere C-terminale Stellen von TP53, erhöht dessen Acetylierung und Aktivierung, um den Zellzyklusarrest zu fördern und die Proliferation zu unterdrücken. Verwandte Referenzen: PMID:10673501 PMID:15659650 PMID:16511572
• Phosphoryliert auch andere Substrate, darunter FANCE (Reparatur von DNA-Crosslinks), TLK1 (Chromatin-Zusammensetzung), Histon H3.1 an Thr-11 (epigenetische Genstilllegung), RB1 (Förderung der E2F-Interaktion), SPRTN (Chromatin-Rekrutierung) und PABIR1/FAM122A (G2/M-Checkpoint-Regulation). Verwandte Referenzen: PMID:17296736 PMID:12660173 PMID:12955071 PMID:17380128 PMID:31316063 PMID:33108758
• Die subzelluläre Lokalisierung umfasst den Zellkern, Chromosomen, Zytoplasma und Zentrosomen, was mit ihren Rollen in der Checkpoint-Signalgebung, DNA-Reparatur und Zellzyklusregulation übereinstimmt.
• Ubiquitär exprimiert, mit höchsten Konzentrationen in Thymus, Hoden, Dünndarm und Kolon.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein Phospho-Peptid um Ser280 von humanem Chk1. Der Antikörper ist für den spezifischen Nachweis der phosphorylierten Form konzipiert. Validieren Sie die Spezifität durch Vergleich der Signale in Phosphatase-behandelten vs. unbehandelten Proben oder durch Verwendung eines nicht-phosphorylierten Blockierpeptids.
• Für den Western Blot wird die Verwendung geeigneter Phosphatase-Inhibitoren während der Probenvorbereitung empfohlen, um das Phosphorylierungssignal zu erhalten. Für Chk1 wird eine Bande nahe 54 kDa erwartet.
• Beim ELISA sollte die Verwendung eines plattengebundenen Phospho-Peptids und einer Nicht-Phospho-Peptid-Kontrolle in Betracht gezogen werden, um die Phospho-Spezifität zu bestätigen.
• Die Chk1-Phosphorylierung an Ser280 wird durch DNA-Schäden induziert. Die Stimulation von Zellen mit DNA-schädigenden Agenzien (z.B. UV, Hydroxyharnstoff) kann die Detektion in relevanten Zelllinien verbessern.

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