Anti-Phospho-CDK2-T160 Kaninchen-Polyclonal-Antikörper für WB, IHC-P, ELISA – P24941

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CDK2

• CDK2 (Cyclin-abhängige Kinase 2) ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die eine zentrale Rolle bei der Regulation des Zellzyklus spielt, insbesondere beim G1-S-Übergang und der Progressionsphase S. Sie phosphoryliert wichtige Substrate wie RB1, p53/TP53, NPM1 und BRCA2, um die DNA-Synthese, die Zentrosomenduplikation und transkriptionelle Programme zu fördern. CDK2 ist essenziell für die Meiose, aber für die Mitose entbehrlich. Zugehörige Referenzen: PMID:10499802 PMID:10884347 PMID:10995386 PMID:11051553

• Die Kinaseaktivität von CDK2 wird streng durch Cyclinbindung und Phosphorylierung kontrolliert. Cyclin E/CDK2-Komplexe treiben den G1-S-Übergang an, während Cyclin A/CDK2-Komplexe die S-G2-Progressionsphase vorantreiben. Die vollständige Aktivierung erfordert die Phosphorylierung an Thr-160 innerhalb der T-Schleife durch den CDK-aktivierenden Kinase(CAK)-Komplex. Zugehörige Referenzen: PMID:18372919 PMID:19238148 PMID:19561645

• CDK2 lokalisiert in mehreren subzellulären Kompartimenten, darunter Zellkern, Zentrosom, Cajal-Körper, Zytoplasma, Zytoskelett und Endosom, was seine vielfältigen Funktionen bei der Zellzykluskoordination, DNA-Reparatur und Signalgebung widerspiegelt.

• CDK2 ist an DNA-Schadensantwort- und Reparaturwegen beteiligt. Es phosphoryliert BRCA2 zur Regulation der homologen Rekombinationsreparatur und phosphoryliert NBN zur Beeinflussung der Telomererhaltung, wodurch es zur genomischen Stabilität beiträgt. Zugehörige Referenzen: PMID:15800615 PMID:20195506 PMID:21319273 PMID:28216226

• CDK2 phosphoryliert die Histonmethyltransferase EZH2 und fördert so die Erhaltung von epigenetischen H3K27me3-Markierungen und die Gen-Silencing. Dies unterstreicht die Rolle von CDK2 bei der epigenetischen Regulation. Zugehörige Referenzen: PMID:20935635

• Posttranslationale Modifikationen von CDK2 wie Phosphorylierung, Acetylierung und S-Nitrosylierung modulieren seine Aktivität und Stabilität. CDK2 ist ein Mitglied der Proteinkinase-Superfamilie mit ATP-bindenden und metallbindenden Domänen. Zugehörige Referenzen: PMID:20079829

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Dieser Antikörper erkennt spezifisch CDK2, das an Thr-160 phosphoryliert ist. Um die Phosphorylierung während der Probenvorbereitung zu erhalten, fügen Sie Phosphataseinhibitoren zu Lysepuffern hinzu und vermeiden Sie lange Inkubationen bei Raumtemperatur.
• Für das Western Blotting sind Banden bei ca. 30 kDa und 34 kDa zu erwarten (entsprechend CDK2-Isoformen oder durch Phosphorylierung induzierte Verschiebungen). Verwenden Sie mit λ-Phosphatase behandelte Lysate als Negativkontrolle und S-Phase-angereicherte Zellextrakte als Positivkontrolle.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) sollten Methoden zur Antigenrettung optimiert werden, um Phospho-Epitope zu erhalten. Validieren Sie die Färbespezifität durch Vergleich mit der Gesamt-CDK2-Färbung oder durch Verwendung von Peptidwettbewerbsassays.
• Für ELISA-Anwendungen kann der Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz verwendet werden; titrieren Sie sorgfältig und bestätigen Sie die Linearität für den quantitativen Nachweis von Phospho-CDK2-T160.

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