Kaninchen-polyklonaler Anti-Phospho-BRD4 (Ser1070)-Antikörper für WB, ELISA - O60885

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von BRD4

• BRD4 (Bromodomain-haltiges Protein 4), auch bekannt als HUNK1, ist ein Chromatin-Leser, der an acetylierte Histone bindet und epigenetische Erinnerung über Zellteilungen hinweg überträgt. Es bleibt während des gesamten Zellzyklus mit Chromatin assoziiert, trägt zur Erhaltung der Chromatinstruktur bei und ermöglicht postmitotische Transkription (PubMed:20871596, PubMed:23086925, PubMed:23317504, PubMed:22334664, PubMed:23589332). Verwandte Referenzen: PMID:20871596 PMID:23086925 PMID:23317504 PMID:22334664 PMID:23589332

• Es rekrutiert den P-TEFb-Komplex an Promotoren und Enhancer, fördert die Phosphorylierung der C-terminalen Domäne (CTD) der RNA-Polymerase II an Ser2 und erleichtert die transkriptionelle Elongation. JMJD6 kooperiert mit BRD4, um negative Regulatoren wie HEXIM1 und 7SK snRNA zu verdrängen (PubMed:16109376, PubMed:16109377, PubMed:19596240). Verwandte Referenzen: PMID:16109376 PMID:16109377 PMID:19596240

• BRD4 erkennt acetyliertes RELA, was zur Rekrutierung von P-TEFb und Aktivierung des NF-kappa-B-Signalwegs führt (PubMed:19103749). Verwandte Referenzen: PMID:19103749

• Nach Phosphorylierung durch CK2 wird BRD4 an p53/TP53-Zielpromotoren rekrutiert und reguliert die p53-vermittelte Transkription (PubMed:23317504). Verwandte Referenzen: PMID:23317504

• In der DNA-Schadensantwort fungiert BRD4 als Chromatin-Isolator, indem es den Condensin-2-Komplex an acetylierte Histone rekrutiert, die Ausbreitung der H2AX-Phosphorylierung begrenzt und die Signalübertragung moduliert.

• BRD4 ist überwiegend im Kern und auf Chromosomen lokalisiert, was mit seiner Rolle bei der Chromatin-Regulation übereinstimmt. Es wird ubiquität exprimiert und erfährt verschiedene posttranslationale Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung und Acetylierung.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Um die BRD4-Phosphorylierung an Ser1070 während der Probenvorbereitung zu erhalten, fügen Sie Lysepuffern Phosphatase-Inhibitoren hinzu und vermeiden Sie lange Inkubation bei Raumtemperatur.
• Für das Western Blotting (WB) beträgt das vorausgesagte Molekulargewicht von BRD4 152 kDa; bestätigen Sie die Bandenidentität mit geeigneten Positiv- und Negativkontrollen (z. B. mit Phosphatase behandelte Lysate).
• ELISA-Experimente sollten phosphorylierte und nicht-phosphorylierte Peptidkontrollen enthalten, um die Antikörperspezifität für das Phospho-Epitop zu bestätigen.
• Optimieren Sie Antikörperverdünnung und Inkubationsbedingungen empirisch; typische Startverdünnungen für WB liegen im Bereich von 1:500 bis 1:2000.

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