Anti-Phospho-ATM (S1981) Kaninchen-poliklonaler Antikörper für WB und ELISA - Q13315

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von ATM

• ATM ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die als wichtiger DNA-Schadenssensor fungiert und Checkpoint-Signalisierung als Reaktion auf Doppelstrangbrüche (DSB) und genotoxische Belastungen aktiviert (PMID:10550055, PMID:10839545, PMID:10910365).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:10550055, PMID:10839545, PMID:10910365

• Es erkennt das [ST]-Q-Konsensmotiv und phosphoryliert zahlreiche nachgeschaltete Ziele, darunter p53/TP53, CHEK2, BRCA1 und andere, um DNA-Reparatur und Zellzyklusarrest zu koordinieren (PMID:10550055, PMID:10766245, PMID:10802669).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:10550055, PMID:10766245, PMID:10802669

• Ein kritischer früher Schritt in der DSB-Signalisierung ist die ATM-vermittelte Phosphorylierung von Histon H2AX an Ser139, die Chromatin markiert, das Bruchstellen flankiert (nach Ähnlichkeit).

• ATM ist außerdem an der allelischen Exklusion von Prä-B-Zellen, der T-Zellentwicklung und der Signaltransduktion beteiligt und wird als Tumorsuppressor angesehen.

• Die Kinase ist im Kern lokalisiert, aber auch an zytoplasmatischen Vesikeln, dem Zentrosom und Peroxisomen, wo sie PEX5 phosphoryliert, um die Pexophagie als Reaktion auf reaktive Sauerstoffspezies (ROS) zu fördern (PMID:26344566).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:26344566

• ATM phosphoryliert ERCC6, um die Chromatin-Remodellierung an DNA-Doppelstrangbrüchen zu erleichtern (PMID:29203878), und phosphoryliert TTC5/STRAP an Ser203, um seine nukleäre Translokation nach DNA-Schäden zu antreiben (PMID:15448695).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:29203878, PMID:15448695

• ATM-Phosphorylierung von DYRK2 an nukleären Standorten schützt DYRK2 vor MDM2-vermittelter Ubiquitinierung und proteasomaler Degradation nach genotoxischer Belastung (PMID:19965871).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:19965871

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches Phosphopeptid erhoben, das der S1981-Phosphorylierungsstelle von humanem ATM entspricht; es wird nur Spezifität für die phosphorylierte Form erwartet.
• Fügen Sie für Western Blotting Phosphatase-Inhibitoren zu Lyse- und Waschpuffern hinzu, um die Phosphorylierung zu erhalten. Erwägen Sie die Überprüfung der Phospho-Spezifität durch Behandlung von Proben mit Lambda-Proteinphosphatase oder durch Durchführung von Peptid-Blocking-Experimenten.
• Aufgrund der großen Größe von ATM (~351 kDa) verwenden Sie ein Acrylamidgel mit niedrigem Prozentsatz (z. B. 6%) und verlängerte Transferzeiten. Ein Gradientengel (4-15%) kann die Trennung ebenfalls verbessern.
• Validieren Sie den Antikörper in Ihrem spezifischen Modellsystem; Kreuzreaktivität mit Maus ist angegeben, aber die Leistung in anderen Arten sollte individuell getestet werden.
• Bestätigen Sie für ELISA Beschichtungs- und Nachweisbedingungen, da phospho-spezifische Antikörper optimierte Puffer-pH-Werte und Blockierungsreagenzien erfordern können.

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