Anti-Phospho-AKT1 (Ser473) Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - P31749

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: AKT1-Funktion und -Lokalisierung

• AKT1 (RAC-alpha Serin/Threonin-Proteinkinase, auch bekannt als PKBα) ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die zur AKT-Familie gehört, die beim Menschen drei eng verwandte Isoformen (AKT1, AKT2, AKT3) umfasst, die Stoffwechsel, Proliferation, Überleben, Wachstum und Angiogenese steuern. Verwandte Referenzen: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:15861136

• Sie wirkt stromabwärts von PI3K und leitet Signale von Insulin, IGF1, EGF und PDGF weiter; sie phosphoryliert über 100 downstream-Ziele, einschließlich GSK3, TSC2, FOXO-Transkriptionsfaktoren und Komponenten des mTORC1-Weges, und koordiniert so Glukosestoffwechsel, Proteinsynthese und Genexpression. Verwandte Referenzen: PMID:12176338, PMID:12964941, PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:21432781

• Die Phosphorylierung von TSC2 an Ser939 und Thr1462 durch AKT1 hebt die mTORC1-Hemmung auf, treibt das Zellwachstum und die Proteinsynthese voran; umgekehrt phosphoryliert und hemmt AKT1 GSK3α/β, um die Glykogensynthese und den Zellzyklusfortschritt zu fördern. Verwandte Referenzen: PMID:12150915, PMID:12172553

• AKT1 fördert das Zellüberleben, indem es pro-apoptotische Proteine wie BAD (Ser136) und MAP3K5/ASK1 (Ser83) phosphoryliert und inaktiviert sowie CREB1 aktiviert, um anti-apoptotische BCL2 und MCL1 hochzuregulieren. Verwandte Referenzen: PMID:10926925, PMID:11154276, PMID:9829964

• Es reguliert die Zytoskeletaldynamik und die Zellmigration durch Phosphorylierung von Substraten wie Palladin (PALLD) und SPATA13 und beeinflusst den Adhäsionsumsatz und die Motilität. Verwandte Referenzen: PMID:20471940, PMID:19934221

• AKT1 lokalisiert im Zytoplasma, Kern, Plasmamembran und im mitochondrialen Intermembranraum. Es ist ubiquitär exprimiert, wobei erhöhte Phospho-Ser473-Spiegel bei Prostata- und Brustkrebs beobachtet wurden, was es mit onkogener Signalgebung verbindet.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Der Antikörper wird gegen ein synthetisches phosphoryliertes Peptid erzeugt, das den Resten um Ser473 von humanem Akt1 entspricht; erwägen Sie die Verwendung von phosphatasbehandelten Lysaten oder einem nicht-phospho-AKT1-Antikörper als Negativkontrolle, um die Phosphorylierungsspezifität zu verifizieren.
• Im WB ist eine einzelne Bande bei ~56 kDa zu erwarten; verwenden Sie geeignete Positivkontrollen (z. B. Lysate aus insulin- oder EGF-stimulierten Zellen) und optimieren Sie Lademengen und Belichtungszeiten.
• Für ELISA kann die Beschichtung von Platten mit Phospho-Peptid und Nicht-Phospho-Peptid helfen, die phosphospezifische Bindung zu bewerten; fügen Sie Blockierungs- und Waschschritte hinzu, um den unspezifischen Hintergrund zu reduzieren.
• Eine Kreuzreaktivität ist für Mensch, Maus und Ratte angegeben; jedoch wird eine Validierung in der relevanten Probenmatrix jeder Spezies empfohlen.
• Da der Antikörper die phosphorylierte Form von AKT1 erkennt, kann er auch andere AKT-Isoformen (AKT2, AKT3) erkennen, wenn das Epitop konserviert ist; bestätigen Sie die Spezifität bei Bedarf mit isoformspezifischen Knockdown- oder Knockout-Modellen.

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