Anti-Phospho-Akt-T-T308 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - P31749 / P31751 / Q9Y243

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: AKT (AKT1/AKT2/AKT3) Funktion und Lokalisierung

• AKT1 ist einer von drei eng verwandten Serin/Threonin-Proteinkinasen (AKT1, AKT2, AKT3), die kritische Prozesse wie Stoffwechsel, Proliferation, Zellüberleben, Wachstum und Angiogenese regulieren. Verwandte Referenzen: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:15861136

• Als zentraler Knotenpunkt der PI3K-Signalgebung phosphoryliert AKT über 100 Downstream-Substrate an Serin/Threonin-Resten, um die Wirkungen von Insulin, Wachstumsfaktoren und anderen Reizen zu vermitteln. Verwandte Referenzen: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:21432781

• Im Glukose-Stoffwechsel fördert AKT die insulinstimulierte Glukoseaufnahme über die Translokation von SLC2A4/GLUT4 und die Glykogensynthese durch Hemmung von GSK3A/B; es phosphoryliert auch TBC1D4, um die 14-3-3-Bindung auszulösen, die für den Glukosetransport wesentlich ist. Verwandte Referenzen: PMID:11994271

• AKT treibt das Zellüberleben voran, indem es pro-apoptotische Substrate wie MAP3K5, BAD und FOXO-Transkriptionsfaktoren phosphoryliert und hemmt, was zur zytoplasmischen Sequestrierung von FOXO-Proteinen und zur Hochregulierung von anti-apoptotischen Genen wie BCL2 und MCL1 über CREB1 führt. Verwandte Referenzen: PMID:11154276, PMID:10358075, PMID:9829964, PMID:10926925

• AKT aktiviert die mTORC1-Signalgebung durch Phosphorylierung von TSC2 und anderen Regulatoren (CASTOR1, DEPDC5) und steuert so die Proteinsynthese und das Zellwachstum. Verwandte Referenzen: PMID:12150915, PMID:12172553, PMID:31548394, PMID:33594058

• Subzellulär kommt AKT im Zytoplasma, Kern, Zellmembran und im mitochondrialen Intermembranraum vor, was seine vielfältigen Funktionen widerspiegelt.

• Beim Menschen wird AKT1 ubiquitär exprimiert, wobei erhöhte phosphorylierte Formen bei Prostata- und Brustkrebs beobachtet wurden, was auf eine Rolle beim Tumorfortschritt hindeutet.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phospho-Peptid um Thr308 von humanem Akt; die Phosphorylierung an diesem Rest ist kritisch für die Aktivierung von Akt. Daher ist der Antikörper spezifisch für die phosphorylierte Form und sollte das nicht-phosphorylierte Akt nicht erkennen.
• Da Thr308 über die AKT1-, AKT2- und AKT3-Isoformen hinweg konserviert ist, wird erwartet, dass der Antikörper mit den entsprechenden phosphorylierten Formen bei Maus und Ratte kreuzreagiert, wie durch die Daten zur Kreuzreaktivität angegeben.
• Für die Western Blot-Analyse verwenden Sie während der Probenvorbereitung geeignete Phosphatase-Inhibitoren, um die Phosphorylierung zu erhalten. Die vorhergesagten Molekulargewichte der Isoformen liegen bei ~48-55 kDa; bestätigen Sie die Bandspezifität mit positiven und negativen Kontrollen (z. B. insulinstimulierte vs. unbehandelte Zellen).
• ELISA-Anwendungen können zum Einfangen oder Nachweis von Phospho-Akt in Zelllysaten geeignet sein; optimieren Sie Beschichtungs- und Nachweisbedingungen für Ihre spezifische Matrix.
• Da die T308-Phosphorylierung dynamisch ist, fügen Sie geeignete experimentelle Kontrollen zur Beurteilung der Aktivierung des Signalwegs ein (z. B. Behandlung mit PI3K-Inhibitor).

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