Anti-PHD2/EGLN1 Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q9GZT9

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: PHD2/EGLN1 Funktion und Lokalisierung

• PHD2/EGLN1 (Egl nine homolog 1), auch als HIF-Prolin-Hydroxylase 2 (HIF-PH2) oder PHD2 bezeichnet, ist ein zellulärer Sauerstoffsensor, der vom EGLN1-Gen kodiert wird. Er gehört zur EGLN-Familie der Prolin-Hydroxylasen und ist das primäre Isoenzym, das die Stabilität des hypoxie-induzierbaren Faktors (HIF) unter normoxischen Bedingungen reguliert.
• Unter normalen Sauerstoffbedingungen katalysiert PHD2 die Hydroxylierung spezifischer Prolinreste innerhalb der sauerstoffabhängigen Abbaudomänen (ODD) von HIF-1α und HIF-2α. Diese posttranslationale Modifikation fördert die Erkennung durch den von-Hippel-Lindau (VHL) E3-Ubiquitin-Ligase-Komplex, was zum proteasomalen Abbau der HIFα-Untereinheiten führt. Folglich werden HIF-vermittelte Transkriptionsprogramme unterdrückt.
• Während der Hypoxie ist die PHD2-Aktivität vermindert, wodurch HIFα-Proteine akkumulieren können, mit HIF-1β dimerisieren und in den Zellkern translozieren, um die Expression von Genen zu steuern, die an Angiogenese, Erythropoese, metabolische Anpassung und Zellüberleben beteiligt sind. Dieser Mechanismus liegt der zellulären Anpassung an reduzierte Sauerstoffverfügbarkeit zugrunde.
• PHD2 lokalisiert sich vorwiegend im Zytoplasma, kann aber auch im Zellkern nachgewiesen werden, was seiner Rolle bei der Sauerstoffwahrnehmung und der Modifikation von HIFα-Proteinen in beiden Kompartimenten entspricht.
• Weit verbreitete Expression in Geweben, wobei die höchsten mRNA-Spiegel in Skelettmuskel, Herz, Gehirn, Niere und Nebenniere beobachtet wurden (PubMed:11056053; PubMed:12351678). Das Protein wird in Herzmuskelzellen, aortalen Endothelzellen und glatten Muskelzellen der Koronararterien nachgewiesen. Fetales Gewebe zeigt ebenfalls eine signifikante Expression, insbesondere in Gehirn, Herz, Milz und Skelettmuskel (PubMed:12788921). Verwandte Referenzen: PMID:11056053 PMID:12351678 PMID:12788921
• PHD2 unterliegt mehreren posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Acetylierung, Phosphorylierung und S-Nitrosylierung, die seine Aktivität oder Stabilität modulieren können. Es benötigt Eisen, 2-Oxoglutarat und Ascorbat (Vitamin C) als Kofaktoren für seine Dioxygenase-Aktivität und enthält eine Zinkfingerdomäne.
• Mutationen im EGLN1-Gen sind mit der kongenitalen Erythrozytose Typ 3 (ECYT3) assoziiert, was seine kritische Rolle bei der Regulation von Erythropoetin und der Produktion roter Blutkörperchen unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das zur Erzeugung dieses polyklonalen Antikörpers verwendete Immunogen ist ein rekombinantes Protein, das fast die volle Länge (aa 1-426) von humanem PHD2/EGLN1 umfasst und der kanonischen Sequenz entspricht. Dieses Design kann die Erkennung des endogenen Proteins über mehrere Anwendungen hinweg begünstigen.
• Für Western Blot (WB) Anwendungen sollte ein spezifisches Band beobachtet werden, das dem vorhergesagten Molekulargewicht von ca. 46 kDa entspricht. Eine Optimierung der Probenvorbereitung, der Lademenge und der Detektionsbedingungen wird empfohlen. Positivkontrollen aus Geweben mit hoher PHD2-Expression, wie Skelettmuskel oder Herz, können von Vorteil sein.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) sollte die Testung einer Reihe von Antigen-Retrieval-Methoden und Antikörperverdünnungen in Betracht gezogen werden. Angesichts der dualen zytoplasmatischen/nukleären Lokalisierung von PHD2 sollten Färbemuster im Kontext des zellulären Sauerstoffstatus bewertet werden. Geeignete Gewebe- oder Zelllinien-Kontrollen (z. B. normoxisch vs. hypoxisch) können helfen, die Spezifität zu bestätigen.
• Für ELISA-basierte Assays kann der Antikörper nach Validierung in der relevanten Probenmatrix als Capture- oder Detektionsreagent geeignet sein. Benutzer sollten Kreuzreaktivitäts- und Interferenztests gemäß ihren spezifischen Protokollanforderungen durchführen.
• Obwohl berichtet wird, dass dieser Antikörper mit murinem und rattigem PHD2/EGLN1 kreuzreagiert, werden Sequenzabgleiche und Pilotexperimente empfohlen, um eine äquivalente Reaktivität in diesen Spezies für die beabsichtigte Anwendung zu bestätigen.

CamelBio: Ihre One-Stop-Beschaffungsbrücke

CamelBio fungiert als umfassender Beschaffungspartner für IVD-Hersteller und Forschungslabore und bietet ein breites Portfolio an qualifizierten Rohstoffen, von Antikörpern und rekombinanten Proteinen bis hin zu Hilfsreagenzien. Dieser Anti-PHD2/EGLN1 polyklonale Antikörper unterstützt Untersuchungen zur Hypoxie-Signalgebung, Angiogenese und der Entdeckung von Onkologie-Biomarkern und verkörpert die Qualität der Werkzeuge, die über unsere Plattform verfügbar sind. Ob Sie validierte Antikörperpaare, monoklonale oder polyklonale Antikörper in Bulk benötigen oder Unterstützung bei der Beschaffung schwer zu findender Zielstrukturen suchen, CamelBio rationalisiert Ihren Beschaffungsprozess, um die Assay-Entwicklung vom Konzept bis zur klinischen Anwendung zu beschleunigen.