Anti-PCNA Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P12004

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: PCNA-Funktion und -Lokalisierung

• PCNA ist eine DNA-Sliding-Clamp, die DNA-Polymerasen während der DNA-Replikation Prozessivität verleiht. Verwandte Referenzen: PMID:35585232
• Es wirkt als Hilfsprotein für DNA-Polymerase Delta und Epsilon und verbessert deren Prozessivität während der Elongation des Leitstrangs. Verwandte Referenzen: PMID:35585232
• PCNA spielt eine entscheidende Rolle in der DNA-Schadensreaktion (DDR), indem es die DNA-Replikation mit Reparaturwegen koordiniert und als Plattform für DDR-Proteine dient. Verwandte Referenzen: PMID:24939902
• Posttranslationale Modifikationen von PCNA, einschließlich Mono-Ubiquitinierung und Lys-63-verknüpfter Polyubiquitinierung, bestimmen die Wahl der DNA-Schadenstoleranzwege: Mono-Ubiquitinierung rekrutiert Translesions-Synthese-Polymerasen, während Polyubiquitinierung eine fehlerfreie, rekombinationsvermittelte Reparatur auslöst. Verwandte Referenzen: PMID:24695737
• PCNA stimuliert die 3'-5' Exonuklease- und 3'-Phosphodiesterase-Aktivitäten von APEX2, aber nicht seine AP-Endonuklease-Aktivität, und erfordert das Laden auf die DNA für diese Funktion.
• Hauptsächlich im Zellkern lokalisiert, ist PCNA eine Schlüsselkomponente der Replikationsgabel.
• Mutationen in PCNA sind mit neurodegenerativen Erkrankungen, Taubheit und Zwergwuchs verbunden.
• Das Protein unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Acetylierung, Methylierung, Phosphorylierung und Ubiquitinierung, die seine vielfältigen Funktionen regulieren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht einer konservierten Region (aa 162-261), die zwischen Mensch, Maus und Ratte geteilt wird, was mit der berichteten Kreuzreaktivität übereinstimmt. Validieren Sie die Reaktivität in Ihrer spezifischen Probenmatrix, wenn andere Spezies verwendet werden.
• Für Western Blot ist ein Band bei ~29 kDa zu erwarten; eine Anreicherung des Zellkerns kann die Signalintensität verbessern. Optimieren Sie die Verdünnung des Primärantikörpers mittels Titrationsreihe (z. B. beginnend bei 1:500–1:2000).
• IHC-P kann von einer Antigen-Retrieval profitieren; fügen Sie positive (proliferative Gewebe) und negative (Isotyp-Kontrolle) Kontrollen hinzu, um die Spezifität zu bestätigen.
• ELISA kann zum Nachweis oder zur Quantifizierung von PCNA in Zelllysaten eingesetzt werden; stellen Sie sicher, dass geeignete Beschichtungspuffer und Blockierungsbedingungen für Ihr Assay-Format optimiert sind.
• Erwägen Sie die Verwendung von frischen oder eingefrorenen Proben und minimieren Sie eine längere Lagerung oder wiederholte Gefrier-Tau-Zyklen, um die Integrität des Epitops zu bewahren.

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