Anti-PCK1 monoklonaler Antikörper (PEPCK-C) für Western Blot und ELISA - P35558

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: PCK1-Funktion und Lokalisierung

• PCK1 (Phosphoenolpyruvat-Carboxykinase 1) ist die cytosolische Isoform von PEPCK und dient als geschwindigkeitsbestimmendes Enzym der Gluconeogenese. Es katalysiert die reversible Decarboxylierung und Phosphorylierung von Oxalacetat zu Phosphoenolpyruvat und gleicht cataplerotische und anaplerotische Flüsse im Citratzyklus aus. Verwandte Referenzen: PMID:24863970, PMID:26971250, PMID:28216384

• Unter Bedingungen mit niedrigem Glucosespiegel treibt PCK1 die cataplerotische Umwandlung von Oxalacetat zu Phosphoenolpyruvat für die Gluconeogenese an; bei hohem Glucosespiegel fördert es die anaplerotische Umwandlung von Phosphoenolpyruvat zu Oxalacetat. Verwandte Referenzen: PMID:30193097

• Über seine Stoffwechselfunktion hinaus schaltet die Phosphorylierung an Ser-90 durch AKT1 PCK1 zu einer Serin-Proteinkinase um. Diese "Moonlighting"-Kinaseaktivitität löst die Translokation zum endoplasmatischen Retikulum aus, wo es INSIG1/2 phosphoryliert, um SREBP-Transkriptionsfaktoren freizusetzen und die lipogene Genexpression zu aktivieren. Verwandte Referenzen: PMID:32322062

• PCK1 trägt zur Homöostase von Gedächtnis-CD8+-T-Zellen bei, indem es Phosphoenolpyruvat für Glykogen- und Pentosephosphatwege bereitstellt (nach Ähnlichkeit).

• Subzellulär ist PCK1 überwiegend cytosolisch lokalisiert, wandert jedoch nach AKT-vermittelter Phosphorylierung zum endoplasmatischen Retikulum.

• Zu den Hauptgeweben mit Expression gehören Leber, Niere und Adipozyten, was seine zentrale Rolle im Glucose- und Lipidstoffwechsel widerspiegelt.

• Posttranslationale Modifikationen umfassen Acetylierung, Ubiquitinierung und Phosphorylierung, und strukturell wird PCK1 als GTP-bindende Kinase, Lyase und Decarboxylase klassifiziert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen wurde gegen ein synthetisches Peptid erzeugt, das die Aminosäuren 523–622 nahe dem C-Terminus umfasst, distal zur Ser-90-Phosphorylierungsstelle; berücksichtigen Sie dies bei der Planung von phosphospezifischen oder isoform-spezifischen Nachweisexperimenten.
• Für Western Blotting validieren Sie den Nachweis in Human-, Maus- oder Ratten-Leber-/Nierenlysaten, da diese Gewebe hohe PCK1-Spiegel exprimieren. Die Induktion der Gluconeogenese (z.B. Fasten/cAMP-Behandlung) kann das Signal verstärken.
• Beim ELISA testen Sie die Antikörperpaarung und Kompatibilität mit Sandwich-Formaten; die monoklonale Natur gewährleistet eine konsistente Spezifität über alle Chargen hinweg.
• Angesichts des vorhergesagten Molekulargewichts von 69 kDa stellen Sie eine ausreichende Gelauflösung und Transferbedingungen sicher; posttranslationale Modifikationen können die beobachtete Bande verschieben.

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