Kaninchen-monoklonaler Anti-PAK3-Antikörper für WB, IHC-P, ELISA – O75914

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von PAK3

• PAK3 ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase und gehört zur Familie der p21-aktivierten Kinasen (PAK).
• PAK3 wirkt als nachgeschalteter Effektor der kleinen GTPasen CDC42 und RAC1 und reguliert die Dynamik des Zytoskeletts, die Zellmigration und den Zellzyklusverlauf.
• In Neuronen spielt PAK3 eine entscheidende Rolle bei der Morphogenese dendritischer Dornen, der Synapsenbildung und der synaptischen Plastizität, teilweise durch die Phosphorylierung der regulatorischen leichten Kette des Myosins II (MLC) zur Kontrolle der Aktomyosin-Kontraktilität.
• PAK3 wird im Nervensystem stark exprimiert, insbesondere in postmitotischen Neuronen des sich entwickelnden und postnatalen zerebralen Kortex sowie des Hippocampus.
• Die Kinase wird durch die Bindung an aktives CDC42/RAC1 aktiviert, was zu einer Konformationsänderung und Autophosphorylierung an mehreren Serin-/Threoninresten führt.
• PAK3 phosphoryliert nachgeschaltete Zielproteine wie MAPK4, MAPK6 und TNNI3/Troponin I und verbindet es dadurch mit der MAPKAPK5-vermittelten F-Aktin-Polymerisation sowie der Kontraktilität der Herzmuskulatur.
• Auf subzellulärer Ebene befindet sich PAK3 überwiegend im Zytoplasma.
• Durch alternatives Spleißen entstehen mehrere Isoformen; Mutationen in PAK3 werden mit X-chromosomaler geistiger Behinderung in Verbindung gebracht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das der N-terminalen Region (AS 1–100) des humanen PAK3 entspricht. Dies deutet darauf hin, dass der Antikörper wahrscheinlich ein Epitop innerhalb dieser Domäne erkennt, das bei Maus und Ratte konserviert sein könnte.
• Beim Western Blot (WB) liegt die erwartete Bande bei etwa 62 kDa; als Positivkontrollen sollten neuronales Gewebe oder Zelllysate (z. B. aus Gehirn oder Hippocampus) verwendet werden.
• Für die Immunhistochemie (IHC-P) werden in Paraffin eingebettete Gehirnschnitte empfohlen; geeignete Methoden zur Antigen-Retrieval sollten optimiert werden.
• ELISA kann mit dem Immunogen-Peptid oder rekombinantem PAK3-Protein durchgeführt werden; die Kreuzreaktivität mit verwandten Mitgliedern der PAK-Familie sollte untersucht werden.
• Da PAK3 sowohl im sich entwickelnden als auch im adulten Nervensystem exprimiert wird, kann eine entwicklungsstadiumspezifische Validierung erforderlich sein.
• Es sollten stets geeignete Negativkontrollen (z. B. Knockout-Zelllinien oder -Gewebe) eingeschlossen werden, um die Spezifität zu bestätigen.

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