Anti-NSUN2 Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q08J23

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NSUN2-Funktion und -Lokalisierung

• NSUN2, auch bekannt als MISU, MRT5, SAKI oder TRM4, ist eine RNA-Cytosin-C(5)-Methyltransferase, die die Bildung von 5-Methylcytosin (m5C) in verschiedenen RNA-Spezies, einschließlich tRNAs, mRNAs und langen nicht-kodierenden RNAs, katalysiert. Verwandte Referenzen: PMID:17071714 PMID:22995836 PMID:31199786
• Es methyliert spezifische Cytosinreste in tRNA-Vorstufen: Positionen 34 und 48 von intronhaltiger tRNA(Leu)(CAA) und Positionen 48–50 von tRNA(Gly)(GCC), eine Modifikation, die für die tRNA-Stabilität und die Generierung von tRNA-abgeleiteten Fragmenten unerlässlich ist. Verwandte Referenzen: PMID:17071714 PMID:22995836 PMID:31199786
• In mRNAs rekrutiert die durch NSUN2 vermittelte m5C-Methylierung das YBX1-Protein, das an modifizierte Transkripte bindet und sie vor Abbau schützt, wodurch die mRNA-Stabilität erhöht wird. Verwandte Referenzen: PMID:22395603 PMID:31358969 PMID:34556860
• m5C-Modifikationen in mRNA erleichtern auch den nuklearen Export durch Erkennung durch das Adaptorprotein ALYREF/THOC4, wodurch die Methylierung mit dem nukleo-zytoplasmatischen Transport von Transkripten verknüpft wird. Verwandte Referenzen: PMID:28418038
• NSUN2 methyliert nicht-kodierende Vault-RNAs (vtRNAs), wie VTRNA1.1, und fördert ihre Verarbeitung in kleine regulatorische RNAs (svRNA4), die die epidermale Differenzierung steuern. Verwandte Referenzen: PMID:23871666 PMID:31186410
• Es zielt auch auf mitochondriale tRNAs für die C5-Methylierung ab und erweitert seine regulatorische Rolle auf die mitochondriale Genexpression. Verwandte Referenzen: PMID:31276587
• Subzellulär findet sich NSUN2 im Nukleolus, Nukleoplasma, Zytoplasma, in den Mitochondrien und am mitotischen Spindelapparat und wird über Exosome sezerniert, was seine vielfältigen funktionellen Kompartimente widerspiegelt.
• NSUN2 wird im adulten und fetalen Gehirn sowie in lymphoblastoiden Zellen exprimiert und ist mit Schlüsselprozessen wie Zellzyklus, Differenzierung und Spermatogenese assoziiert; Mutationen werden mit geistiger Behinderung in Verbindung gebracht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für das Western Blotting sollten Sie 20–50 µg Gesamtproteinlysat laden; die endogene NSUN2-Bande erscheint bei ca. 86 kDa. Optimieren Sie Blockierung und Primärantikörper-Verdünnung für Ihre Probe.
• Bei der Immunhistochemie (Paraffinschnitte) wird eine hitzeinduzierte Antigen-Retrieval (z. B. Citratpuffer, pH 6,0) empfohlen; titrieren Sie den Antikörper, um eine spezifische Färbung zu erzielen.
• Für die Immunfluoreszenz testen Sie die Fixierung mit 4% Paraformaldehyd und die Permeabilisierung mit 0,1% Triton X-100. Fügen Sie geeignete Kontrollen hinzu, um die Lokalisierung zu bestätigen.
• Dieser Antikörper kreuzreagiert laut Herstellerangaben mit Maus- und Ratten-NSUN2; validieren Sie die Spezifität in der Spezies und dem Gewebe von Interesse mittels Knock-out- oder Knockdown-Modellen.
• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 617–708 (C-terminale Region); beachten Sie, dass das polyklonale Serum mehrere Isoformen oder Abbauprodukte erkennen kann.
• Für ELISA-Anwendungen optimieren Sie die Konzentration des Beschichtungsantigens und die Antikörperverdünnung und fügen Sie Negativkontrollen hinzu, um den Hintergrund zu bewerten.

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