Anti-NSF Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, IP, ELISA - P46459

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NSF-Funktion und -Lokalisierung

• Proteinidentität: NSF (N-Ethylmaleimid-sensitives Fusionsprotein), auch bekannt als Vesikel-fusionierende ATPase, SKD2 oder SEC18, ist ein Mitglied der AAA-ATPase-Familie, das durch das NSF-Gen (Gen-ID: 4905) kodiert wird.
• Kernfunktion: Dieses Protein ist für den vesikelvermittelten Transport essentiell, katalysiert die Fusion von Transportvesikeln innerhalb der Golgi-Zisternen und erleichtert den Transport vom endoplasmatischen Retikulum zum Golgi-Stack.
• Frachtlieferung: NSF scheint als ein für die Lieferung von Frachtproteinen in alle Golgi-Kompartimente erforderliches Fusionsprotein zu wirken, unabhängig vom Ursprung der Vesikel, und gewährleistet so einen ordnungsgemäßen intrazellulären Transport.
• AMPAR-Interaktion: NSF interagiert mit der AMPA-Rezeptor-Untereinheit GRIA2 und beeinflusst deren Membranzyklus, wodurch es die synaptische Plastizität moduliert (nach Ähnlichkeit).
• Subzelluläre Lokalisierung: Das Protein befindet sich überwiegend im Zytoplasma, was mit seiner Rolle bei Membranfusionsereignissen übereinstimmt.
• Wichtige Eigenschaften und Krankheitszusammenhänge: NSF zeigt ATP-bindende und Hydrolase-Aktivität, benötigt Magnesium als Kofaktor und unterliegt Phosphorylierung und Acetylierung. Mutationen im NSF-Gen sind mit der Entwicklungs- und epileptischen Enzephalopathie (DEE96) sowie geistiger Behinderung verbunden.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Immunogen-Design: Der Antikörper wurde gegen ein rekombinantes Fragment hergestellt, das die Aminosäuren 251-400 des menschlichen NSF abdeckt, eine Region innerhalb der D2-ATPase-Domäne. Dies bietet Spezifität für das native Protein.
• Western Blotting: Für WB ist eine Bande um 83 kDa zu erwarten, die dem endogenen NSF entspricht. Optimieren Sie die Blockierungs- und Detektionsbedingungen für Ihren Probentyp (Lysate von Mensch, Maus oder Ratte).
• Immunfluoreszenz/Immunzytochemie: In der IF/ICC sollte NSF eine zytoplasmatische Färbung zeigen. Eine Permeabilisierung ist erforderlich; verwenden Sie geeignete Fixierungsmethoden, um Epitope zu erhalten.
• Immunopräzipitation: Die polyklonale Natur ermöglicht eine effiziente Erfassung nativer NSF-Komplexe. Validieren Sie die IP-Effizienz in Ihrem System und erwägen Sie bei Bedarf eine Vernetzung.
• ELISA: Der Antikörper kann als Erfassungs- oder Nachweisreagenz verwendet werden; führen Sie Schachbrett-Titrationen durch, um die optimalen Beschichtungs- und Nachweiskonzentrationen zu ermitteln.
• Allgemeine Überlegungen: Als Kaninchen-Polyklonaler erkennt er mehrere Epitope, was das Risiko eines Signalverlusts durch Maskierung eines einzelnen Epitops verringert. Fügen Sie immer positive und negative Kontrollen ein, die spezifisch für Ihre experimentellen Bedingungen sind.

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