Anti-NPAS2 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - Q99743

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NPAS2-Funktion und -Lokalisierung

• NPAS2 (Neuronales PAS-Domain-haltiges Protein 2), auch bekannt als MOP4, bHLHe9 oder PASD4, ist ein Basic-Helix-Loop-Helix-PAS-Transkriptionsfaktor, der eine Kernkomponente der zirkadianen Uhr bildet. Es fungiert als transkriptioneller Aktivator im positiven Zweig der molekularen Uhr-Feedbackschleife.
• Das Protein heterodimerisiert mit BMAL1 (oder BMAL2) und bindet an E-Box-Elemente (5'-CACGTG-3') in den Promotoren uhrkontrollierter Gene und treibt die rhythmische Transkription von Kernuhr-Repressoren (PER1/2/3, CRY1/2) und downstream-Zielen voran, die an Stoffwechsel, Schlaf und andere physiologische Prozesse beteiligt sind.
• NPAS2 spielt eine kritische Rolle bei der Aufrechterhaltung zirkadianer Verhaltensweisen unter normalen Licht/Dunkel- und Fütterungsbedingungen sowie bei der Synchronisation des Fütterungsverhaltens mit geplantem Nahrungsangebot. Es trägt auch zur Schlafhomöostase und zur Regulation von angstähnlichen Verhaltensweisen durch tageszeitliche Modulation der GABARA1-Rezeptorexpression im Gehirn bei.
• Über die zentrale Uhr hinaus reguliert NPAS2 die Gen-Transkription in peripheren Geweben wie der Leber und steuert wichtige Stoffwechselwege. Es ist auch an der DNA-Schadensreaktion beteiligt, indem es Zellzyklus- und DNA-Reparaturgene reguliert.
• Das NPAS2-BMAL1-Heterodimer nimmt an einer sekundären Feedbackschleife teil, indem es die Kernrezeptoren NR1D1/2 und RORA/B/G aktiviert, die wiederum die BMAL1-Transkription reprimieren bzw. aktivieren und zur zirkadianen Robustheit beitragen.
• Subzellulär lokalisiert NPAS2 im Zellkern, was seiner Rolle als Transkriptionsfaktor entspricht. Es enthält hämbindende PAS-Domänen, und die Hämbindung kann seine Aktivität beeinflussen.
• Posttranslationale Modifikationen und Proteinwechselwirkungen sind entscheidend für die Bestimmung der zirkadianen Periodizität, und Störungen der NPAS2-vermittelten Rhythmen werden mit Herz-Kreislauf-Erkrankungen, Krebs, metabolischen Syndromen und Alterung in Verbindung gebracht.
• Das Protein ist ubiquitär exprimiert, mit herausragenden Rollen im suprachiasmatischen Kern (SCN) des Gehirns (der zentralen Uhr) und in peripheren Oszillatoren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen für diesen polyklonalen Kaninchenantikörper entspricht einer Sequenz innerhalb der Aminosäuren 45 – 240 von humanem NPAS2 (NP_002509.2), einem Bereich, der einen Teil der N-terminalen bHLH-Domäne und die erste PAS-Domäne umfasst. Dieses Design kann Reaktivität gegenüber nativen und denaturierten Formen verleihen.
• Für das Western Blotting wird eine Bande um 92 kDa erwartet. Erwägen Sie die Verwendung von reduzierenden Bedingungen und Standard-SDS-PAGE-Protokollen. Da NPAS2 einem zirkadianen Zyklus unterliegt, sollte der Zeitpunkt der Probennahme streng kontrolliert werden, um eine optimale Expression zu erfassen.
• Bei der Durchführung von Immunfluoreszenz/Immunzytochemie zeigt NPAS2 typischerweise eine Kernlokalisation. Fixierungs- und Permeabilisierungsmethoden sollten für Kernziele optimiert werden, und eine Co-Färbung mit einem Kernmarker kann die Spezifität bestätigen.
• In ELISA-Anwendungen validieren Sie den Antikörper im relevanten Probesystem und fügen geeignete Kontrollen hinzu, um den Hintergrund zu bewerten. Polyklonale Antikörper können Chargen-zu-Chargen-Variabilitäten aufweisen, daher wird eine konsistente Chargenverfolgung empfohlen.
• Eine Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-NPAS2 wird berichtet; jedoch wird eine Sequenzausrichtung der Immunogenregion empfohlen, um die Reaktivität in anderen Arten abzuschätzen. Für jede neue Art oder Anwendung ist eine empirische Validierung unerlässlich.

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