Anti-NOX2/gp91phox polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P04839

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NOX2/gp91phox-Funktion und Lokalisation

• NADPH-Oxidase 2 (NOX2), auch bekannt als gp91phox, ist die katalytische Untereinheit des Phagozyten-NADPH-Oxidase-Komplexes, einem kritischen Enzym der angeborenen Immunität.
• Katalysiert die Übertragung von Elektronen von zytosolischem NADPH auf molekularen Sauerstoff, um Superoxidanion zu produzieren, eine reaktive Sauerstoffspezies, die für die Abtötung von Mikroben essentiell ist. Verwandte Referenzen: PMID:15338276 PMID:36241643 PMID:36413210
• Die Elektronenübertragung erfolgt über Flavinadenindinukleotid (FAD) und zwei Häm-Moleküle und gipfelt in einer Outer-Sphere-Reaktion, die Superoxid erzeugt. Verwandte Referenzen: PMID:38355798
• Die Aktivierung beinhaltet die phosphorylierungsabhängige Bindung von zytosolischem NCF1/p47-phox an das C-Terminus von CYBA/p22-phox, was zur Assemblierung des aktiven Komplexes an der Plasmamembran oder Phagosomenmembran führt. Verwandte Referenzen: PMID:19028840 PMID:38355798
• Lokalisiert hauptsächlich an der Plasmamembran und Phagosomenmembran, was eine räumliche Kontrolle der Produktion reaktiver Sauerstoffspezies ermöglicht.
• Wird vorwiegend in Neutrophilen exprimiert, was zu seiner Rolle im oxidativen Burst professioneller Phagozyten passt.
• Mutationen im CYBB-Gen, das NOX2 kodiert, sind mit der X-chromosomalen chronischen Granulomatose assoziiert, einer Immundefizienz, die durch einen beeinträchtigten respiratorischen Burst und rezidivierende Infektionen gekennzeichnet ist.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht einer zytoplasmatischen Region von NOX2 (aa 385–570), was darauf hindeutet, dass der Antikörper sowohl denaturierte als auch native Konformationen erkennen könnte; bewerten Sie seine Eignung für WB und Immunfluoreszenz basierend auf Ihrer Probenvorbereitung.
• Für WB ist das vorhergesagte Molekulargewicht für das Vorläuferprotein ~65 kDa; das reife Glykoprotein kann bei ~91 kDa wandern. Validieren Sie das beobachtete Band in Ihrem spezifischen Lysat und schließen Sie geeignete Kontrollen ein.
• Bei IHC-P und IF/ICC ist eine Membran- und Phagosomenfärbung zu erwarten. Für den Zugang zum intrazellulären Epitop ist eine ausreichende Permeabilisierung erforderlich; optimieren Sie Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen.
• Für ELISA kann Peptid- oder rekombinantes Protein-Coating zur Antikörperbindung verwendet werden. Berücksichtigen Sie Coating-Puffer, Blockierbedingungen und Antikörpertitration, um ein optimales Signal-Rausch-Verhältnis zu etablieren.
• Die Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte deutet auf eine konservierte Epitopstruktur hin; validieren Sie die Spezifität in diesen Spezies durch Knockout-Gewebe oder Peptidkompetition.
• Funktionelle Studien können die Stimulation von Phagozyten (z.B. mit PMA) beinhalten, um Translokation oder verstärkten Nachweis zu beobachten; stellen Sie geeignete Kontrollen für den Aktivierungszustand sicher.

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