Anti-Notch1-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P46531

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Notch1-Funktion und -Lokalisierung

• Notch1 (neurogener Locus Notch-Homolog-Protein 1) ist ein Single-Pass-Typ-I-Transmembranprotein, auch bekannt als Translokations-assoziiertes Notch-Protein TAN-1, das beim Menschen vom NOTCH1-Gen kodiert wird.
• Fungiert als Rezeptor für membrangebundene Liganden Jagged-1 (JAG1), Jagged-2 (JAG2) und Delta-1 (DLL1) und spielt eine zentrale Rolle bei der Zellfate-Bestimmung, Differenzierung, Proliferation und Apoptose.
• Nach Ligandenaktivierung wird die intrazelluläre Domäne von Notch (NICD) freigesetzt und bildet einen transkriptionellen Aktivator-Komplex mit RBPJ/RBPSUH, um downstream-Zielgene zu regulieren, einschließlich derer des Enhancer-of-split-Locus.
• Beteiligt an mehreren Entwicklungsprozessen: Angiogenese (negative Regulation der Endothelzellproliferation und -migration), thymische Reifung von CD4+- und CD8+-Zellen, follikuläre Differenzierung, Kleinhirnentwicklung über DNER und Bestimmung der Links/Rechts-Symmetrie durch das Gleichgewicht der Cilien am Links-Rechts-Organisator.
• Unterdrückt neuronale und myogene Differenzierung; kann die HIF1A-Funktion durch Sequestrierung von HIF1AN verstärken; erforderlich für THBS4-vermittelte schützende Astrozytogenese nach Verletzung.
• Die subzelluläre Lokalisierung umfasst die Zellmembran, die Membran spät endosomaler Vesikel und den Zellkern, was konsistent mit seinen Signal- und Transkriptionsrollen ist.
• Wird in fetaler Milz, Hirnstamm und Lunge exprimiert; bei Erwachsenen vorwiegend in lymphatischen Geweben gefunden.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Glykosylierung, Disulfidbrückenbildung, Hydroxylierung und Phosphorylierung; das Protein unterliegt proteolytischer Verarbeitung und Ubiquitinierung.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 2456-2555 von humanem Notch1 (NP_060087.3), located in the cytoplasmic domain. Diese Region ist über Mensch, Maus und Ratte konserviert, was die berichtete Kreuzreaktivität unterstützt.
• Für Western Blotting wird ein Hochmolekulargewichts-Standard und ein Polyacrylamidgel mit niedrigem Prozentsatz (z. B. 6–8 %) aufgrund der großen Proteingröße (273 kDa) empfohlen. Verlängerte Transferzeiten können für einen effizienten Membrantransfer erforderlich sein.
• Validieren Sie den Antikörper in einem geeigneten Probensystem wie HeLa, Jurkat oder anderen Zelllinien, die bekanntermaßen Notch1 exprimieren. Ein Positivkontrollgewebe wie Milz oder Hirnstamm kann für IHC-P geeignet sein.
• Für Immunhistochemie (Paraffin) kann eine Antigen-Retrieval mittels hitzemediierter Citratpuffer (pH 6,0) oder EDTA-Puffer (pH 9,0) in Betracht gezogen werden, wobei die optimalen Bedingungen experimentell ermittelt werden sollten.
• Bei IF/ICC wird eine Permeabilisierung mit Triton X-100 oder Saponin vorgeschlagen, um intrazelluläre Epitope zu detektieren, da sich das Immunogen im zytoplasmatischen Schwanz befindet.
• Notch1 unterliegt proteolytischer Verarbeitung; im WB können mehrere Bänder beobachtet werden. Das全长-Vorläuferprotein (~300 kDa) und die verarbeiteten transmembranen/zytoplasmatischen Formen (~120 kDa und ~110 kDa) können detektiert werden, abhängig vom Zelltyp und Aktivierungszustand.

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