Anti-NLRP3-Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB, IP, ELISA - Q96P20

Wichtige Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von NLRP3

• NLRP3 (NACHT-, LRR- und PYD-Domänen enthaltendes Protein 3), auch als Cryopyrin bekannt, ist ein zytosolischer Mustererkennungsrezeptor, der als Sensorkomponente des NLRP3-Inflammasoms fungiert. Verwandte Referenzen: PMID:16407889, PMID:18403674, PMID:18604214
• Nach der Aktivierung durch Pathogene, Kristalle oder Umweltpartikel oligomerisiert NLRP3 und rekrutiert ASC sowie Pro-Caspase-1, wodurch ein Inflammasomkomplex entsteht, der die Aktivierung von Caspase-1 fördert. Dies führt zur Spaltung und Sekretion der proinflammatorischen Zytokine IL-1β und IL-18 sowie zur durch Gasdermin D vermittelten Pyroptose. Verwandte Referenzen: PMID:23582325, PMID:28847925, PMID:31189953
• Das NLRP3-Inflammasom fördert außerdem die unkonventionelle Sekretion des Alarmins HMGB1 und verstärkt dadurch entzündliche Reaktionen. Verwandte Referenzen: PMID:22801494
• Unter Ruhebedingungen wird NLRP3 in einem autoinhibierten, ADP-gebundenen Zustand gehalten. Verschiedene Stimuli, die einen K+-Ausstrom und Membranstörungen auslösen, führen zu seiner Konformationsaktivierung. Verwandte Referenzen: PMID:35114687
• Nach der Aktivierung wird NLRP3 zum Mikrotubuli-organisierenden Zentrum (MTOC) transportiert, wo es durch NEK7 freigeschaltet wird. Anschließend wird es durch Bindung an Phosphatidylinositol-4-phosphat (PtdIns4P) an Vesikel des dispergierten trans-Golgi-Netzwerks (dTGN) relokalisiert, was zur Bildung eines aktiven Inflammasoms führt. Verwandte Referenzen: PMID:36442502, PMID:39173637
• Unabhängig von seiner Rolle im Inflammasom kann NLRP3 in T-Helferzellen vom Typ 2 (Th2) als Transkriptionsregulator wirken, an DNA binden und die IL-4-Expression fördern, um die Th2-Differenzierung voranzutreiben, mit Auswirkungen auf allergisches Asthma und Tumorwachstum.
• Auf subzellulärer Ebene ist NLRP3 im Zytosol, in den Mitochondrien, im endoplasmatischen Retikulum und im Golgi-Apparat lokalisiert und kann sekretiert werden. Es wird überwiegend in Makrophagen, dendritischen Zellen und epithelialen Barrieren exprimiert, mit geringeren Konzentrationen in Monozyten und Osteoblasten.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 100–210 in der Nähe der N-terminalen PYD-Domäne des menschlichen NLRP3. Es sollte berücksichtigt werden, dass der Antikörper ein Epitop in dieser Region erkennen könnte, was bei der Untersuchung verkürzter oder mutierter Konstrukte relevant sein kann.
• Für den Western Blot sollte der Antikörper mit Lysaten aus menschlichen Makrophagen oder mononukleären Zellen des peripheren Blutes validiert werden, in denen die NLRP3-Expression bekannt ist. Eine Bande bei etwa 118 kDa wird erwartet.
• Bei Immunpräzipitationsexperimenten sollten optimierte Lysebedingungen gewährleistet werden, um die Integrität des NLRP3-Komplexes zu erhalten, da das Zielprotein mit mehreren Proteinen im Inflammasom interagiert.
• Für ELISA-Anwendungen werden vorläufige Schachbrett-Titrationen mit rekombinantem NLRP3 oder Zelllysaten empfohlen, um optimale Beschichtungs- und Detektionskonzentrationen zu bestimmen.
• Da die NLRP3-Aktivierung posttranslationale Modifikationen wie Ubiquitinierung und Phosphorylierung umfassen kann, sollte in Betracht gezogen werden, die Zellen mit geeigneten Stimuli wie LPS + Nigericin zu behandeln, um Veränderungen in den Detektionsmustern zu beobachten.

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