Anti-NLRC4 Poliklonaler Antikörper für WB - Q3UP24

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von NLRC4

• NLRC4 (NLR family CARD domain-containing protein 4) ist auch unter den Aliasen Ipaf, CARD12, CLAN und weiteren bekannt; es ist eine Schlüsselkomponente von Inflammasomen, die angeborene Immunantworten gegen intrazelluläre Pathogene antreiben.
• Das Protein fungiert als Sensor, das nach indirekter Erkennung bakterieller und pilzlicher Bestandteile den NLRC4-Inflammasomenkomplex aufbaut, was zur Aktivierung von Caspase-1, Produktion proinflammatorischer Zytokine (z. B. IL-1β) und Pyroptose von Makrophagen führt.
• NLRC4 wirkt in Kooperation mit Proteinen der NAIP-Familie (NAIP1, NAIP2, NAIP5), die direkt spezifische Pathogen-abgeleitete Liganden wie Flagellin, T3SS-Stäbchenproteine (z. B. PrgJ) und T3SS-Nadelproteine binden und dadurch die Assemblierung des NLRC4-Inflammasoms auslösen.
• Das NLRC4-Inflammasom ist entscheidend für die Wirtsabwehr gegen gramnegative Bakterien wie Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Legionella pneumophila und Pseudomonas aeruginosa sowie gegen den Pilzpathogen Candida albicans.
• In der Darmschleimhaut unterscheidet NLRC4 zwischen kommensalen und pathogenen Bakterien und induziert eine protektive IL-1β-Sekretion spezifisch als Antwort auf Pathogene wie Salmonella oder P. aeruginosa.
• Subzellulär lokalisiert sich NLRC4 im Zytosol und kann nach Aktivierung Inflammasomen-Specks bilden.
• Gewebeexpression: NLRC4 wird von intestinalen mononukleären Phagozyten exprimiert, was seine Rolle bei der Schleimhautimmunität unterstreicht.
• Das Protein verfügt über eine C-terminale Leucin-reiche Repeat-Domäne (LRR), eine zentrale Nukleotidbindedomäne (NBD/NACHT) mit ATP-bindender Aktivität und eine N-terminale CARD-Domäne; es wird während der Inflammasomenaktivierung phosphoryliert.

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Das für diesen polyklonalen Antikörper verwendete Immunogen entspricht den Aminosäuren 71-170 von Maus-NLRC4. Diese Region liegt innerhalb der N-terminalen Domäne, was aufgrund von Sequenzkonservierung Kreuzreaktivität mit menschlichen und Ratten-Orthologen ermöglichen kann. Validieren Sie die Kreuzreaktivität in Ihrem spezifischen Versuchsaufbau.
• Das vorausgesagte Molekulargewicht von NLRC4 beträgt etwa 116 kDa. Berücksichtigen Sie für Western Blotting eine geeignete Gelprozentzahl und Transferbedingungen und fügen Sie Positivkontrollen wie Makrophagen-Zelllinien (z. B. J774, RAW 264.7) hinzu, die stimuliert werden, um die NLRC4-Expression zu induzieren.
• In Immunfluoreszenz (IF) oder IF-P-Anwendungen liegt NLRC4 unter Steady-State-Bedingungen typischerweise zytosolisch vor, kann aber nach Stimulation punktförmige Inflammasomen-Specks bilden. Eine Co-Färbung mit ASC oder Caspase-1 kann helfen, aktivierte Inflammasome sichtbar zu machen.
• Für ELISA-Anwendungen kann dieser Antikörper nach entsprechender Validierung der Paarung als Fang- oder Nachweisreagenz verwendet werden. Titrieren und testen Sie ihn unter Ihren Assay-Bedingungen.

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