Polyklonaler Anti-NGLY1-Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - Q96IV0

Wichtige Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von NGLY1

• NGLY1 (N-Glykanase 1) ist eine zytoplasmatische Peptid:N-Glykanase, die die Abspaltung N-verknüpfter Glykane von denaturierten Glykoproteinen katalysiert und dabei Asparagin in Asparaginsäure umwandelt.
• Das Enzym zielt bevorzugt auf Proteine mit High-Mannose-Oligosacchariden anstelle von Glykane des komplexen Typs und wirkt spezifisch auf fehlgefaltete Proteine, die aus dem endoplasmatischen Retikulum in das Zytosol rücktransportiert wurden, während native Proteine intakt bleiben.
• Die Deglykosylierung durch NGLY1 ist ein notwendiger Schritt für den proteasomvermittelten Abbau bestimmter fehlgefalteter Glykoproteine und verbindet das Enzym mit dem ER-assoziierten Abbauweg (ERAD).
• Das Enzym ist eine Zinkmetalloprotease (Schlüsselwort: Metallbindung; Zink) und unterliegt posttranslationalen Modifikationen einschließlich Acetylierung und Phosphorylierung, was auf regulatorische Mechanismen hindeutet.
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen, die möglicherweise unterschiedliche funktionelle Eigenschaften oder Gewebeverteilungen aufweisen.
• Die dreidimensionale Struktur des Proteins wurde bestimmt (Schlüsselwort: 3D-Struktur) und liefert Einblicke in seinen katalytischen Mechanismus und die Substraterkennung.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Beim Western Blot beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht 74 kDa; für eine klare Trennung sollten der Gelanteil und die Transferbedingungen optimiert werden.
• Für Immunfluoreszenz/ICC kann eine Permeabilisierung erforderlich sein, um das zytoplasmatische NGLY1-Protein nachzuweisen; die Färbung sollte in Zellen mit bekannten Expressionsniveaus validiert werden.
• Bei ELISA-Tests sollten verschiedene Konzentrationen des Beschichtungsantigens und Antikörperverdünnungen getestet werden. Positive und negative Kontrollproben sollten eingeschlossen werden, um die Spezifität sicherzustellen.
• Aufgrund des polyklonalen Charakters ist eine Variabilität zwischen Chargen möglich; es wird empfohlen, jede neue Charge in der vorgesehenen Anwendung und im vorgesehenen Probensystem zu validieren.
• Wiederholte Einfrier-Auftau-Zyklen sollten vermieden werden. Zur Aufrechterhaltung der Antikörperstabilität sollte das Produkt unter den empfohlenen Bedingungen gelagert werden.

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