Anti-NFKB1 polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - P19838

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von NFKB1

• NFKB1 codiert die p105-Vorläuferprotein, das zur aktiven p50-Untereinheit prozessiert wird. p105 fungiert als zytoplasmatisches Retentionsfaktor für NF-kappa-B-Proteine, während p50 zusammen mit RELA/p65 den aktiven NF-kappa-B-Komplex bildet. Verwandte Referenzen: PMID:1423592

• NF-kappa-B ist ein pleiotroper Transkriptionsfaktor, der an Entzündungen, Immunität, Zellwachstum, Tumorentstehung und Apoptose beteiligt ist. Er liegt als Homo- oder Heterodimere von Rel-ähnliche Domänen enthaltenden Proteinen vor, wobei das p65-p50-Heterodimer die am häufigsten vorkommende Form ist.

• Der NF-kappa-B p65-p50-Komplex bindet spezifisch an die kappa-B-Konsensussequenz 5'-GGRNNYYCC-3' in Enhancer-Regionen von Zielgenen und reguliert so Immun- und Akutphasenantworten. Verwandte Referenzen: PMID:1740106, PMID:7830764

• NFKB1 ist sowohl im Zytoplasma als auch im Zellkern lokalisiert; inaktive NF-kappa-B-Komplexe werden durch I-kappa-B-Inhibitoren im Zytoplasma gehalten. Nach Stimulation wird I-kappa-B phosphoryliert und abgebaut, wodurch die nukleäre Translokation von NF-kappa-B ermöglicht wird.

• Posttranslationale Modifikationen wie Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung regulieren die NF-kappa-B-Aktivität.

• Das p50-p50-Homodimer wirkt als transkriptioneller Repressor, kann aber in Verbindung mit BCL3 zu einem Aktivator werden.

• NFKB1 spielt auch eine Rolle bei der Repression des MAPK-Signalwegs durch Komplexbildung mit MAP3K8; die proteasomenabhängige Degradation von p105 setzt aktives MAP3K8 frei.

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 740-964 von NFKB1, die im C-terminalen Bereich von p105 liegen. Daher wird erwartet, dass der Antikörper das vollständige p105-Vorläuferprotein (~105 kDa) und nicht die prozessierte p50-Untereinheit erkennt. Berücksichtigen Sie dies bei der Versuchsplanung, um p105 von p50 zu unterscheiden.
• Für Western Blot wird eine Bande bei etwa 105 kDa erwartet. Optimieren Sie Ladekontrollen und Antikörperverdünnung für Ihr Probenystem.
• Bei Immunpräzipitation validieren Sie die Fähigkeit des Antikörpers, native NFKB1-Komplexe unter nicht denaturierenden Bedingungen zu binden.
• Für IHC-P und IF/ICC bestätigen Sie die subzelluläre Lokalisation (zytoplasmatisch vs. nukleär) unter basalen und stimulierten Bedingungen, um den Aktivierungsstatus von NF-kappa-B widerzuspiegeln.
• Bei ELISA-Anwendungen kann eine Titrierung des Antikörpers gegen rekombinantes Antigen oder Zelllysate erforderlich sein, um eine geeignete Arbeitskonzentration zu ermitteln.

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