Anti-NF-κB2 monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - Q00653

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NF-κB2-Funktion und Lokalisierung

• NF-κB2 kodiert für die p100-Untereinheit, die einem proteolytischen Prozess unterzogen wird, um die aktive DNA-bindende p52-Untereinheit zu erzeugen; das Isoform p49 wird auch durch alternatives Spleißen produziert.
• p100/p52 gehört zur NF-kappa-B-Transkriptionsfaktor-Familie und bildet Homo- oder Heterodimere mit Rel-ähnlichen Proteinen (RELA, RELB, REL, NFKB1), um die Genexpression zu regulieren.
• Im nicht-kanonischen NF-kappa-B-Signalweg wird p100, das mit RelB assoziiert ist, von IKKα phosphoryliert und zu p52 prozessiert, was zur Kerntranslokation des RelB-p52-Transkriptionsaktivatorkomplexes führt.
• p52-Homodimere wirken als Transkriptionsrepressoren, während RelB-p52-Heterodimere die Transkription aktivieren und an kappa-B-Stellen (5'-GGRNNYYCC-3') in Promotoren von Immun- und Entzündungsgenen binden.
• NF-κB2 ist an einer Vielzahl biologischer Prozesse beteiligt, darunter Entzündung, Immunität, Zellwachstum, Differenzierung und Apoptose.
• Zusammen mit RELB reguliert NF-κB2 die circadiane Uhr, indem es die transkriptionsaktivierende Aktivität des CLOCK-BMAL1-Heterodimers reprimiert.
• Die subzelluläre Lokalisierung ist sowohl cytoplasmatisch (als inaktive p100/I-kappa-B-Komplexe) als auch nuklear (als aktive p52-haltige Dimere).
• Ank-Repeats, Isopeptidbindungen und Ubl-Konjugation (SUMOylierung) sind posttranslationale Modifikationen, und das Protein wird auch phosphoryliert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 745-877 innerhalb der C-terminalen Ankyrin-Repeat-Domäne von p100, die in der prozessierten p52-Untereinheit fehlt; daher erkennt der Antikörper möglicherweise bevorzugt die vollständige Länge von p100 (~97 kDa). Validieren Sie bei Bedarf die Reaktivität gegen sowohl p100 als auch p52 in Ihrem Modellsystem.
• Für Western Blotting verwenden Sie Standard-SDS-PAGE- und Transferbedingungen; für p100 ist eine Bande nahe 97 kDa zu erwarten. Niedrigere Banden können Zwischenprodukte der Prozessierung oder Abbauprodukte darstellen.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) können je nach Aktivierungsstatus von NF-κB2 im Gewebe sowohl nukleäre als auch cytoplasmatische Färbungen beobachtet werden. Schließen Sie geeignete Kontrollen für die Signalspezifität ein.
• Für ELISA kann der Antikörper mit rekombinantem p100 oder Zelllysaten verwendet werden; stellen Sie sicher, dass das beschichtende Antigen die C-terminale Epitop-Region enthält.
• Die Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte deutet auf eine Konservierung der immunogenen Sequenz zwischen diesen Spezies hin, aber eine Sequenzalignierung wird empfohlen, um die Epitop-Identität zu bestätigen.

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