Anti-NF-kB p65/RelA monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA, ChIP - Q04206

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NF-kB p65/RelA Funktion und Lokalisation

• Die NF-kB p65-Untereinheit (auch bekannt als RELA, NFKB3) ist eine Kernkomponente des NF-Kappa-B-Transkriptionsfaktorkomplexes, eines pleiotropen Regulators, der in fast allen Zelltypen vorkommt.
• NF-Kappa-B-Komplexe sind Homo- oder Heterodimere, die aus Proteinen mit REL-ähnlicher Domäne gebildet werden; das Heterodimer aus RELA und NFKB1 (p50) ist die häufigste Form und fungiert als Transkriptionsaktivator.
• RELA/p65 spielt eine zentrale Rolle bei Entzündungs- und Immunantworten sowie bei Zelldifferenzierung, Proliferation, Apoptose und Tumorentstehung, indem es an Kappa-B-Stellen in den Promotoren von Zielgenen bindet.
• In nicht stimulierten Zellen werden NF-Kappa-B-Dimere durch Inhibitoren (I-Kappa-B) im Zytoplasma zurückgehalten; nach Aktivierung wird I-Kappa-B phosphoryliert und abgebaut, wodurch RELA in den Zellkern translozieren kann, um die Genexpression zu regulieren.
• RELA unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Acetylierung, Phosphorylierung, Methylierung, S-Nitrosylierung und Ubiquitinierung, die seine Aktivität, Stabilität und Interaktionen feinabstimmen.
• Funktionsstudien haben gezeigt, dass RELA für die Cytokin-Genexpression in T-Zellen essentiell ist. Verwandte Referenzen: PMID:15790681
• RELA wurde als ein Schlüsseltranskriptionsfaktor identifiziert, der die Interferonantwort während einer SARS-CoV-2-Infektion reguliert. Verwandte Referenzen: PMID:33440148
• Das Protein ist hauptsächlich im Zellkern und Zytoplasma lokalisiert, mit dynamischem Austausch zwischen diesen Kompartimenten in Abhängigkeit vom Aktivierungsstatus.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blot (WB) ist ein spezifisches Band bei etwa 60 kDa zu erwarten, was mit dem berechneten Molekulargewicht von NF-kB p65 übereinstimmt.
• Für IHC-P und IF/ICC wird eine Validierung im relevanten Gewebe oder Zellsystem empfohlen; für Paraffin-schnittpräparate kann eine Antigen-Demaskierung erforderlich sein.
• Die KO-Validierungsdaten weisen auf eine Spezifität für endogenes RELA hin; Anwender sollten geeignete Kontrollen (z.B. Knockout-Zellysate) in ihren Experimenten einschließen.
• In ChIP-Assays erkennt der Antikörper natives, an Chromatin gebundenes NF-kB p65; optimale Fixierungs- und Fragmentierungsbedingungen sollten empirisch ermittelt werden.
• Obwohl der Antikörper für mehrere Anwendungen gelistet ist, sollten individuelle Assay-Bedingungen (z.B. Verdünnung, Inkubationszeit) im Labor des Endanwenders optimiert werden.

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