Anti-NDST1 Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - P52848

Kernspezifikationen und Parameter des Produkts

Biologischer Hintergrund: NDST1-Funktion und Lokalisierung

• NDST1 ist das essenzielle bifunktionelle Enzym, das die Heparansulfat-Modifikation durch sequenzielle Katalyse der N-Deacetylierung und N-Sulfatierung von Glucosaminresten einleitet und das N-sulfatierte Heparosan produziert, das für die nachgeschaltete Heparin- und Heparansulfat-Biosynthese erforderlich ist. Zugehörige Referenzen: PMID:35137078, PMID:9230113, PMID:9744796
• Dieser enzymatische Schritt ist geschwindigkeitsbestimmend und bestimmt das endgültige Sulfatierungsmuster des Heparansulfats, was wiederum dessen Fähigkeit zur Interaktion mit Proteinen wie L-Selektin bestimmt und somit an der Adhäsion und dem Transport von Entzündungszellen beteiligt ist.
• Die NDST1-Aktivität ist für die exosomale Sekretion von Syndecan, SDCBP (Syntenin) und CD63 notwendig, was auf eine nicht-kanonische Funktion bei der Biogenese oder Freisetzung extrazellulärer Vesikel hinweist. Zugehörige Referenzen: PMID:22660413
• Eine alternativ gespleißte Isoform (Isoform 2) weist keine katalytischen Aktivitäten auf und fungiert als dominant-negativer Regulator, möglicherweise durch Veränderung der Stöchiometrie der biosynthetischen Enzymkomplexe.
• Subzellulär ist NDST1 ein integrales Membranprotein des Golgi-Apparats mit dualer Lokalisierung in den Membranen des cis-Golgi und des trans-Golgi-Netzwerks.
• Das Protein wird in vielen Geweben exprimiert, ist jedoch besonders reichlich in Herz, Leber und Bauchspeicheldrüse vorhanden, was mit Organsystemen übereinstimmt, die eine umfangreiche Heparansulfat-Biosynthese erfordern.
• NDST1 unterliegt der Glykosylierung und der Bildung von Disulfidbrücken; Mutationen im NDST1-Gen sind mit geistiger Behinderung assoziiert, was seine entscheidende Rolle bei der Entwicklung unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen (AS 40–170) umfasst die N-terminale Region, die sowohl von Isoform 1 als auch von der dominant-negativen Isoform 2 geteilt wird; daher kann der Antikörper beide Spleißvarianten erkennen und sollte im relevanten Probensystem validiert werden.
• Beim Western Blot läuft das reife NDST1-Protein bei einem scheinbaren Molekulargewicht von ~101 kDa; Bandenverschiebungen oder mehrere Banden können durch Glykosylierung oder Disulfid-gebundene Komplexe entstehen, daher ist die Verwendung von reduzierenden Bedingungen und geeigneten Positivkontrollen ratsam.
• Für ELISA kann dieser polyklonale Antikörper als Fänger- oder Nachweisreagenz dienen; Endanwender sollten Schachbrett-Titrationen mit ihrem spezifischen Zielantigen (rekombinantes Protein oder Zelllysat) durchführen, um die Leistung zu optimieren.
• Da eine Kreuzreaktivität mit Maus-NDST1 berichtet wird, ist der Antikörper für Mausstudien geeignet; dennoch sollte die Epitopkonservierung durch Sequenzabgleich und Pilotexperimente in Proben aus Mausmaterial bestätigt werden.

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