Anti-NCF4/p40-phox monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IP, ELISA - Q15080

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von NCF4/p40-phox

• NCF4/p40-phox ist eine Untereinheit des Phagozyten-NADPH-Oxidase-Komplexes, der Superoxidanionen durch Übertragung von Elektronen von NADPH auf molekularen Sauerstoff erzeugt.
• Das Protein enthält SH3- und PX-Domänen, wodurch es als Protein 4 mit SH3- und PX-Domänen (SH3PXD4) klassifiziert wird; es ist auch bekannt als neutrophiler NADPH-Oxidase-Faktor 4.
• Die Aktivierung des Komplexes erfordert die Assemblierung von zytosolischen Untereinheiten einschließlich NCF4 mit dem membrangebundenen Kernkomplex; dieser Prozess wird durch phosphorylierungsabhängige Bindung von NCF1/p47-phox an CYBA/p22-phox initiiert.
• Die NCF4-Expression ist auf hämatopoetische Zellen beschränkt.
• Subzellulär lokalisiert es sich im Zytoplasma und Zytosol und assoziiert nach Aktivierung mit Endosomenmembranen und der Plasmamembran.
• Das Protein unterliegt Phosphorylierung und alternativem Spleißen und ist bei Defekten an der chronischen Granulomatose beteiligt.
• Das Molekulargewicht der kanonischen Isoform beträgt ungefähr 39 kDa.

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das die Aminosäuren 240-339 umfasst und sich in der C-terminalen Region des humanen NCF4 befindet. Diese Region umfasst einen Teil der PX-Domäne und angrenzende Sequenzen, sodass der Antikörper volllanges NCF4 und möglicherweise Spleißvarianten, die dieses Segment enthalten, erkennen kann.
• Für das Western Blotting ist unter reduzierenden Bedingungen eine Bande nahe 39 kDa zu erwarten; verwenden Sie als Positivkontrolle hämatopoetische Zelllysate (z. B. HL-60, Neutrophile).
• Bei der Immunhistochemie kann paraffineingebettete Schnitte eine hitzeinduzierte Epitop-Retrieval erfordern; Antikörperverdünnung und Inkubationsbedingungen sollten auf bekannten positiven Geweben wie Milz oder Knochenmark optimiert werden.
• Für die Immunpräzipitation bietet das monoklonale Kaninchen-Format oft eine hohe Affinität, aber die Ko-Immunpräzipitation der Komponenten des NADPH-Oxidase-Komplexes kann milde Lysebedingungen erfordern, um Protein-Protein-Interaktionen zu erhalten.
• Beim ELISA kann der gegen das Peptid-Immunogen hergestellte Antikörper zum Nachweis von rekombinantem oder nativem NCF4 verwendet werden; die Paarung mit einem anderen epitopspezifischen Antikörper kann die Entwicklung eines Sandwich-ELISA ermöglichen.

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